多通路抑制树突状细胞Toll样受体信号途径诱导恒河猴肝移植免疫耐受的研究

在未成熟树突状细胞（imDC）是诱导免疫耐受研究的一个热点，但imDC在活体内会活化、成熟，不但不能诱导耐受,反而可能促进免疫反应,导致诱导耐受失败。本课题用RNA干扰的方法抑制关键蛋白MyD88和TRAM，阻断树突状细胞Toll样受体MyD88依赖性或非依赖性信号途径，抑制imDC活化成熟，体外实验观察其对恒河猴imDC生物学特性的影响，建立恒河猴肝移植模型，体内实验研究MyD88和TRAM双基因沉默imDC诱导免疫耐受的作用，研究T淋巴细胞无能、Th1、Th2免疫应答偏移及CD4＋CD25+ Treg在本方法诱导免疫耐受中所起作用。该方法抑制imDC活化成熟则可能维持肝移植持久免疫耐受；同时imDC进入动物体内会迁移至特定淋巴器官,遭遇并选择性抑制抗原特异性的T细胞导致免疫耐受,具有作用的靶向性，在非人灵掌类动物上诱导具有靶向性的持久免疫耐受，将具有重要的理论意义及临床应用前景。

利用未成熟树突状细胞（imDC）诱导移植免疫耐受是抗移植排斥反应研究的一个热点，但imDC在在机体处于炎症背景下,在活体内感染、缺血再灌注等多种因素可以使imDC活化、成熟，不但不能诱导耐受,反而能够促进免疫反应,导致诱导耐受失败。本课题拟用RNA干扰的方法抑制关键蛋白MyD88和TRAM，阻断树突状细胞（DC）Toll样受体MyD88依赖性或非依赖性信号途径，抑制imDC活化成熟，诱导恒河猴肝移植免疫耐受。.本课题研究取得以下成果：（1）诱导培养恒河猴树突状DC，构建恒河猴MyD88和TRAM双基因沉默siRNA慢病毒载体和恒河猴MyD88和TRAM基因沉默siRNA腺病毒载体，转染DC，证明DC中MyD88表达在炎症因子刺激DC成熟后刺激T细胞增殖的过程中起到重要作用，抑制DC细胞MyD88表达能减轻DC成熟造成的促T淋巴细胞增殖作用。构建恒河猴MyD88和TRAM双基因沉默siRNA慢病毒载体和恒河猴MyD88和TRAM基因沉默siRNA腺病毒载体，转染DC，双基因沉默siRNA慢病毒转染DC，DC细胞大量死亡，MyD88沉默siRNA腺病毒载体转染DC，腺病毒转染树突状细胞后MyD88蛋白表达下调。混合淋巴细胞实验发现成熟树突状细胞（mDC）组对刺激T细胞增殖的能力强于imDC组，加入炎症因子LPS的imDC刺激T淋巴细胞增殖的作用和mDC组差别无统计学意义；转染MyD88 siRNA腺病毒的imDC被LPS诱导后其刺激T细胞增殖的能力小于mDC组和imDC被LPS诱导组，转染MyD88 siRNA腺病毒的imDC被LPS诱导后其刺激T细胞增殖的能力与imDC差别无统计学意义。（2）研究转染MyD88基因沉默siRNA腺病毒载体的DC对恒河猴肝移植后生存期及急性排斥反应的影响。采用双袖套法建立恒河猴肝移植模型，分为对照组、DC和感染腺病毒的imDC组，后两组分别通过门静脉输入1×10∧6/kgDC细胞和感染腺病毒的imDC细胞，观察发现感染腺病毒的imDC组肝穿组织急排反应病理评分低于对照组，生存期也长于对照组，但差别无统计学意义。术后早期肝功ALT较对照组低,细胞因子IL-2较对照组低，差别有统计学意义。我们采用样本量较少，如能进一步增加样本量可能能得出更有价值的阳性结果。