CD14单核苷酸多态性与高原地区藏族人群胃癌发病易感的作用机制研究

胃癌的病因、发病机制与环境及遗传等因素有关，易感基因在胃癌的发病中具有重要作用。研究发现CD14遗传变异可影响CD14表达水平,并对幽门螺杆菌相关性肿瘤易感，可激活下游信号转导分子，上调NF-κB活性，进而影响细胞因子及炎症介质的表达。我们研究发现CD14 启动子-159位点与高原藏族人群胃癌易感性相关，现拟扩大样本量，在力争发现新突变位点基础上，进一步证实CD14突变位点的存在及其在胃癌发病中的意义；探讨胃癌患者CD14基因型与血清CD14水平及幽门螺杆菌感染之间的相互关系；构建CD14野生型及突变型表达载体，转染人胃癌细胞，检测CD14表达，评价NF-κB活性及对外来刺激的反应；同步检测NF-κB下游细胞因子及人β-防御素2的mRNA及蛋白表达水平，阐明CD14基因突变在胃癌发病中的作用机制，开展分子流行病学及遗传学诊断，为高原地区藏族人群胃癌的病因诊断、综合防治提供分子生物学基础。

CD14为LPS的高亲和受体，能够识别革兰氏阴性菌，为LPS激发机体内多种细胞信号的重要过程，并在胃癌组织呈异常表达。研究发现CD14遗传变异可能影响CD14表达水平和对Hp感染相关性肿瘤易感。本课题通过直接测序的方法检测了CD14基因全长序列信息，在高原藏族胃癌患者中筛选出了6个CD14基因SNPs位点，基因分型发现CD14基因启动子-260C/T多态性与高原藏族人群胃癌发生具有一定相关性，携带T等位基因的个体可促进CD14的高度表达而增加胃癌的发病风险，并与高原胃癌人群Hp感染状况及血清CD14水平密切相关。通过构建CD14-260位C/T等位基因荧光素酶表达载体，荧光素酶活性检测显示在-260位点，T等位基因纯合子相比C等位基因纯合子使CD14具有更强的启动活性，这种作用在LPS的刺激下更为显著，揭示CD14-260位点的不同分型及其在LPS作用下能够影响其基因的启动子强度，导致转录活性增强，Hp感染、血清CD14水平与CD14-260位点多态性改变存在多重联合效应，成为影响高原人群罹患胃癌的敏感性的可能原因。本课题分别构建了CD14真核表达和CD14- shRNA干扰载体，建立了CD14稳定过表达的胃癌SGC-7901细胞系和CD14稳定沉默的胃癌细胞系MGC-803。研究表明CD14稳定转染组NF-κB、hBD-2的活性明显升高，增殖能力下降，细胞因子表达升高，细胞活性显著降低，细胞凋亡率增加，侵袭细胞数下降。而在CD14稳定沉默的MGC-803细胞组中，LPS干预后细胞增殖能力显著增强，凋亡细胞明显减少，而沉默CD14后LPS的凋亡抑制作用受到阻断，LPS诱导的细胞增殖被显著抑制，据此推断胃癌细胞中 CD14 在上调及介导NF-κB信号通路以及激活下游炎症反应中发挥重要作用，从而促进胃癌SGC-7901细胞的凋亡，同时抑制其增殖及侵袭。而LPS能够通过CD14-TLR4及其下游NF-kB信号通路参与胃癌细胞的调控，CD14能够抑制LPS诱发的细胞激活。因此LPS能够促进胃癌细胞增殖以及炎性因子的释放，抑制细胞凋亡，CD14在介导病菌与宿主之间的信号传递中发挥着重要作用。因此，本项课题初步明确了CD14基因SNPs与高原藏族人群胃癌易感的相互关系，阐述了CD14基因胃癌发病中的可能作用机制，为今后开展高原藏族人群胃癌分子流行病学研究提供了一定的基础。