hVPS52（高尔基体相关逆向转运复合体亚基）作为潜在抑癌基因的验证及机制探究

抑癌基因是一类抑制细胞过度生长增殖的基因。hVPS52作为高尔基体相关逆向转运复合体GARP的一个蛋白亚基，很可能具有新抑癌基因HCCS1（即hVPS53）相似的功能，从而成为潜在的抑癌基因。然而至今国际上尚无任何hVPS52与肿瘤的相关性研究。本项目旨在验证hVPS52的抑癌基因功能，并从三方面探讨其可能的抑癌机制；其次，将之作为基因治疗的候选者，在体外和体内进行抑制肿瘤的研究，并从两方面探讨其基因治疗的机制；最后，通过对肿瘤中hVPS52蛋白水平的检测，与肿瘤的分级、转移情况、耐药情况、临床预后等建立联系，为今后的临床治疗决策做指导。该研究将确认一个新的抑癌基因，并可将GARP作为新的肿瘤治疗靶点，同时对于理解肿瘤的发生发展和寻求新的肿瘤治疗方法具有重要的意义。

hVPS52是高尔基体相关逆向转运复合体的一个亚基，与酵母VPS52的同源。hVPS52、hVPS53 (或 HCCS1)和hVPS54，三者参与组成高尔基体相关逆向转运复合体，负责早晚期内体向晚期高尔基体的逆向转运功能。据我们所知，很少有研究提示转运蛋白具有抗肿瘤的效应。. 我们的研究首先在各种肿瘤细胞系（包括胃癌、乳腺癌、肺癌、肠癌、肝癌等）中检测hVPS52蛋白的表达情况。结果发现，在胃癌细胞系（MGC80-3、BGC823）中，hVPS52下调非常明显。66对胃癌和癌旁组织配对检测最终确认了hVPS52在癌组织的低表达，同时也确认了它的杂合性缺失（LOH）的特性。预后分析提示hVPS52的低表达和胃癌临床分期较晚（III-IV期）以及较低的3年总生存率相关，这进一步支持了hVPS52属于抑癌基因的推断。. 其次，我们构建了表达hVPS52的复制缺陷型腺病毒Ad-hVPS52和它的对照病毒Ad-Vec（或简称Ad）。CCK-8细胞活力实验和结晶紫试验均在体外验证了hVPS52过表达的抗肿瘤效应。在TUNEL实验和流式细胞学检测中，胃癌细胞在感染Ad-hVPS52后，与对照Ad相比，出现明显的凋亡增强。体内移植瘤实验进一步证实，hVPS52过表达可以显著抑制胃癌生长。. 最后，我们研究了hVPS52过表达导致肿瘤细胞凋亡的原因和机制。基于一系列的试验，我们发现Cathepsin D/Bax/Cyto C/Caspase9/ Caspase3，而非其它途径，是启动和促进这种凋亡效应的主要通路。. 综上所述，我们证明了hVPS52在胃癌中的蛋白下调和基因组杂合性缺失，发现hVPS52过表达可以诱导肿瘤细胞的凋亡，并鉴定了hVPS52诱导凋亡的路径。我们在临床标本中证实了hVPS52和预后的关联。目前很少有研究提示转运蛋白具有促进凋亡的效应，因而我们的研究提供了一种全新的抗肿瘤策略，值得进一步研究。