鸡CCT基因克隆及其与蛋黄卵磷脂生物合成关系的研究

不同品种鸡的蛋黄卵磷脂含量存在明显差异，如北京油鸡比罗曼粉壳蛋鸡要高出30%以上，但是，至今对家禽蛋黄卵磷脂的合成及调控机理等方面的研究仍是空白。因此，针对蛋黄卵磷脂合成的生化过程，以调控其合成的关键酶- - CCT(CTP:磷酸胆碱胞苷转移酶)为突破口；以蛋黄卵磷脂含量、CCT酶活、相关血液生化指标为目标性状；利用RACE法克隆CCT基因；利用RT-PCR和实时荧光定量法分析CCT基因在不同品种、不同产蛋阶段、不同组织中的时空表达情况；以及利用测序、RFLP等方法筛查多态位点并进行关联分析，从遗传机理上研究CCT基因对蛋黄卵磷脂合成的调控作用，寻找可利用的分子遗传标记。这些研究工作的深入将在认识蛋黄卵磷脂合成的分子机制方面有重要的理论及应用价值，并为今后从生理生化、遗传标记、基因调控网络等角度深入系统地研究蛋黄卵磷脂的调控通路提供理论平台，同时为生产富含卵磷脂鸡蛋的育种工作奠定分子遗传基础。

不同品种鸡的蛋黄卵磷脂含量存在明显差异，如北京油鸡比罗曼褐壳蛋鸡要高出30%以上，但是，至今对家禽蛋黄卵磷脂的合成及调控机理等方面的研究仍是空白。本项目针对蛋黄卵磷脂合成的生化过程，以调控其合成的关键酶CCT(CTP:磷酸胆碱胞苷转移酶)为突破口；克隆获得CCT基因的全长序列，从血液生化水平，mRNA表达水平以及鸡蛋卵磷脂含量水平等3个水平上研究CCT基因对于调控卵磷脂生物合成的作用机理。主要内容包括三个部分：（一）CCT基因由16252bp的碱基组成，其中编码序列碱基共有1104个，共分成8个外显子，编码368个氨基酸。发现了30个突变位点，其中在外显子上发现了6个突变位点，分别位于在外显子4和外显子7上，其余24处突变位点位于内含子当中。共发现4个突变位点分别与胆固醇、粗脂肪、脑磷脂及卵磷脂等营养化学指标存在显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）的相关。（二）血液生化指标以及营养化学指标随着不同产蛋阶段、不同品种变化的变化规律得到了相应的研究。碱性磷酸酶（ALP）、高密度脂蛋白（HDL）以及肌酸激酶（CK）等3个生化指标不随产蛋阶段的变化而变化；胆固醇及甘油三脂随着产蛋阶段的深入而增加，然而低密度脂蛋白（LDL）恰好相反，随着产蛋阶段的深入而降低。（三）卵磷脂合成的相关基因mRNA组织表达谱对不同产蛋阶段、不同品种及不同组织中的变化规律进行了深入的研究。研究表明不同品种在这几种相关基因的mRNA表达水平上不存在显著的差异。推测其表达水平对蛋黄卵磷脂含量不存在直接关系。