基于蛋白聚糖潴留反应研究“痰”在动脉粥样硬化中的病理作用

在动脉粥样硬化病变中，"痰"究竟通过何种致病机制发挥作用，研究尚不够深入和清晰。我们在前期研究基础上，提出假说："痰"在动脉粥样硬化中的病理机制与动脉壁组织成分蛋白聚糖病变密切相关，具体表现为动脉壁蛋白聚糖一些成分含量增多，分子链延长，及对脂蛋白的亲和力增强，导致低密度脂蛋白大量被潴留于动脉壁。该假说为我们首次提出，研究成果可以创新"痰"致病机理的研究内容，为从化痰治法方药中筛选出动脉粥样硬化新型防治药物提供理论依据和靶点。通过综合动脉粥样硬化整体模型和细胞模型两方面研究，观察化痰治法三个代表方药瓜蒌薤白半夏汤、二陈汤、黄连温胆汤对动脉粥样硬化相关蛋白聚糖的合成、分子链的变化、与低密度脂蛋白的亲和力、泡沫化细胞形成、炎症因子微环境、及与蛋白聚糖潴留相关的基因表达等的作用，从整体、组织、细胞、分子、基因等各层次明确动脉壁蛋白聚糖病理变化与"痰"致动脉粥样硬化病变机制之间的关系。

一、项目背景.动脉壁蛋白聚糖促使低密度脂蛋白在动脉壁内沉积和聚集，被认为是动脉粥样硬化发病的关键和启动环节。我们提出假说：“痰”在动脉粥样硬化中的病理机制与动脉壁组织成分蛋白聚糖病变密切相关，化痰方药可抑制蛋白聚糖病变。.二、主要研究内容.（1）在动脉粥样硬化整体模型水平，研究化痰治法方药对动脉粥样硬化灶蛋白聚糖潴留反应的作用。 .（2）通过离体动脉内皮细胞、平滑肌细胞联合培养，并加入氧化低密度脂蛋白作为刺激源，加入巨噬细胞作为炎症反应细胞，以建立动脉粥样硬化的体外细胞模型。 .（3）在细胞模型水平观察化痰治法方药对蛋白聚糖合成、及其与低密度脂蛋白亲和力的作用。在细胞模型水平观察化痰治法方药对调控蛋白聚糖合成和降解因素的炎症细胞因子网络作用。.三、重要结果及关键数据.（1）载脂蛋白E（ApoE）缺陷小鼠模型：随机分为模型组、二陈汤组、瓜蒌薤白半夏组、黄连温胆汤组，每组10只。给予相应药物灌胃治疗，治疗8周取材。主动脉根部HE染色，可见模型组病变严重，各药物组均有明显改善作用，可以减少主动脉蛋白聚糖的潴留积聚。.（2）发现二陈汤组、瓜蒌薤白半夏组、黄连温胆汤组含药血清均有减少巨噬细和平滑肌细胞泡沫化作用。.（3）动脉粥样硬化细胞模型的建立。以插入式培养皿完成三种细胞单核细胞THP-1,内皮细胞HUVECs,平滑肌细胞HSMC在transwell培养皿中共培养的实验。.（4）采用二陈汤中主药；陈皮的单体—橙皮苷，作为治疗药物，观察对细胞模型中硫酸软骨素蛋白成分Biglycan表达的作用。发现25—100μg/mL范围内，橙皮苷可呈剂量依赖梯度抑制Biglycan表达，细胞层蛋白聚糖分子中核心多糖链：糖胺多糖（GAG）含量越来越少，而分解至细胞外液中的小分子GAG含量明显增加，提示橙皮苷具有降解蛋白聚糖作用。.（5）联合培养细胞模型炎症因子测定（PCR芯片）.采用PCR芯片检测了各组细胞模型培养上清液中炎症因子mRNA表达情况，发现炎症负性调控因子—IL-10：模型组明显高于正常组，橙皮苷给药后，IL-10降低。各促炎因子：趋化因子Cxcr1、Cxcr2，Toll样受体呈现模型组高于正常组，经橙皮苷给药可抑制其升高。.四、科学意义.研究成果可以创新“痰”致病机理的研究内容，初步证明我们的假说：“痰”是体内一种易潴留各种疾病致病因子的病理物质。