复合型分子内佐剂骨架的构建及其在HPV 16 L2优势表位疫苗中的应用研究

人乳头瘤病毒（HPV）次要衣壳蛋白L2免疫原性弱，诱发中和及交叉中和抗体的滴度低，保护范围不足以涵盖我国宫颈癌密切相关的高危型HPV优势流行株。本研究拟将细菌N端酯化信号序列（脂蛋白为TLR1/2/6配体）、抗FcγR I单链抗体、通用型Th表位、T4噬菌体fibritin蛋白foldon domain（形成三聚体）等不同功能元件按照一定顺序组合构建分子内佐剂骨架，以HPV 16 L2优势表位aa 17-36为模式表位，将该表位串连重复不同次数，并与分子内佐剂骨架融合，确定该骨架的最大表位容量及最佳表位载量，检测融合抗原的免疫活性，确定分子内佐剂骨架提高疫苗免疫原性的能力。可望获得用于构建高效、低成本新型L2多表位疫苗的分子内佐剂骨架结构，目前未见有相关报道。

本研究筛选得到一种能在大肠杆菌中有效酯化融合蛋白的革兰氏阴性菌N 端酯化信号序列，并将该序列与抗hFcγR I 单链抗体H22、通用型Th 表位、T4 噬菌体fibritin 蛋白foldon domain（形成三聚体）等不同功能元件按照一定顺序组合构建分子内佐剂骨架。并以HPV 16 L2 优势表位aa 17-36 为模式表位，将该表位串连重复3、6、9、12次，并与分子内佐剂骨架融合，构建融合蛋白。研究发现，串联3个拷贝优势表位的融合抗原稳定性优于融合更多拷贝表位的抗原，且具有良好的免疫原性，该融合抗原联合临床上可用的MF59及PIKA佐剂免疫小鼠，能诱发针对HPV 16， 18，58等至少14个型别的中和及交叉中和抗体，有效中和来自α4、α7、α9、α10、β1等多个族群的HPV假病毒，且其免疫效果远好于不带分子内佐剂骨架的E3多肽。由于国际上现有的HPV L1 VLP多价疫苗保护范围不足以涵盖我国宫颈癌密切相关的高危型HPV，且生产成本较高，因此亟需研发能够预防多个HPV型别的低成本广谱预防性疫苗。本研究获得的分子内佐剂骨架融合抗原能有效解决HPV次要衣壳蛋白L2 免疫原性弱，诱发中和及交叉中和抗体的滴度低的问题，因此具有较好的应用前景。本项目研究内容基本按计划完成，申请发明专利1项，主要研究结果的论文正在整理中。