HPV16型E7抗原CTL表位模拟肽抗HPV感染的实验研究

目前临床上针对HPV感染引发的各种疾病，尚缺乏有效治疗手段以根除潜在的感染，寻求理想的治疗方法迫在眉睫。随着病毒免疫学的发展，利用CTL对感染细胞进行特异性杀伤，已成为极具前景的病毒感染免疫疗法。.基于CTL表位肽的多肽疫苗是抗病毒感染疫苗发展的重要方向之一。然而天然的CTL表位肽在体内易被多种肽酶降解、半衰期短，使得天然表位肽疫苗在体内激发CTL反应的效果不佳。因此，对天然CTL表位肽进行改造已经成为现代CTL疫苗学发展的迫切要求。.本项目在前期HPV16 E7抗原CTL表位鉴定的基础上，基于非天然氨基酸，运用分子模拟方法进行HPV16 E7 抗原CTL表位的结构修饰，以获得高亲和性、高特异性的模拟表位，并以三重嵌合小鼠模型评价HPV16 E7抗原CTL模拟表位肽在体内激活CTL反应及抗HPV感染的有效性，为进一步探索基于HPV16 E7抗原CTL模拟表位设计高效拟肽疫苗奠定基础。

目前临床上针对 HPV 感染引发的各种疾病，尚缺乏有效治疗手段以根除潜在的感染，寻求理想的治疗方法迫在眉睫。随着病毒免疫学的发展，利用 CTL 对感染细胞进行特异性杀伤，已成为极具前景的病毒感染免疫疗法。 基于 CTL 表位肽的多肽疫苗是抗病毒感染疫苗发展的重要方向之一。然而天然的 CTL 表位肽在体内易被多种肽酶降解、半衰期短，使得天然表位肽疫苗在体内激发 CTL 反应的效果不佳。因此，对天然CTL 表位肽进行改造已经成为现代 CTL 疫苗学发展的迫切要求。 .本项目在前期的分子结构表征、定量构效关系、分子对接、分子动力学研究蛋白质多肽及配体相互作用基础上，运用分子模拟方法进行HPV16 E7 抗原 CTL 表位的进行非天然氨基酸结构修饰，获得高亲和性、高特异性的模拟表位肽，并以三重嵌合小鼠模型评价 HPV16 E7 抗原 CTL 模拟表位肽在体内激活CTL 反应及抗 HPV 感染的有效性。.实验结果表明CTL表位肽经1位和4位点用D型氨基酸单突变和双突变替换后，得到①（d）RAHYNIVTF， ②RAHY(d)NIVTF, ③（d）RAH（d）YNIVTF 3条表位模拟肽。蛋白质-配体相互作用模拟发现野生型表位肽和表位模拟肽都与MHC-I分子结合稳定，作用位点一致；肽及拟肽合成纯度高于95%以上；表位拟肽具有较强的亲和力，其中表位拟肽①与HLA-A2亲和力最强；运用乳酸脱氢酶方法对野生型表位肽和3条表位模拟肽刺激的CTL进行杀伤效果测试，野生型表位肽为57.87%，①表位模拟肽为33.46%，而其他两条没有明显的杀伤效果；体外细胞实验中证明了表位拟肽①可以诱导CTL产生杀伤作用。.项目研究表明CTL 表位肽经非天然氨基酸改造后体外半衰期明显延长，且亲和力也增强，如果通过佐剂或者其他辅助的修饰，以提高其免疫原性，将有可能得到稳定，亲和力高，免疫效果强的表位模拟肽，为治疗性CTL疫苗的设计进一步奠定基础。