炎症性肠病相关性MicroRNA的筛选、鉴定及其对IκBα基因调控作用的研究

炎症性肠病(IBD)的发病机制仍未明，国内发病率日趋上升，且疗效欠佳。本研究对IBD病变组织进行MicroRNA筛选、鉴定，确定国人IBD相关MicroRNA，并比较溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)，以及中美两地区IBD相关MicroRNA的异同。同时，选择与IBD发生密切的核因子-κB(NF-κB)的抑制蛋白IκBα与IBD相关的miR-126进行相关性研究，从两者同时定位于肠粘膜细胞，其表达量的相关性，以及通过细胞培养、转染、位点突变、mimic模仿等研究，证实miR-126对IκBα基因起负调控作用，影响NF-κB活化。IBD机制的复杂性以及许多MicroRNA功能仍未明，为可持续性研究提供广阔空间，本研究为此提供理论基础和研究方法。明确MicroRNA与IBD的关系，为今后应用MicroRNAs进行IBD诊断，以及应用MicroRNAs类似物和抑制剂治疗IBD有着重大现实意义

本课题按标书设计的要求逐项完成。执行完成情况好。按时完成年度进展报告。基本按照课题的预算使用资金。本课题取得良好的研究成果，已在PLoS One 发表论著1篇，培养硕士4名和青年学术骨干2名，并为在IBD与MicroRNA的关系研究打下良好基础。.主要成果有：1、应用基因芯片筛选出国人UC、克罗恩病（CD）组织中上调和下调的MicroRNA，为进一步研究miRNA与IBD关系提供依据。.2、miR-126在UC活动期大肠组织表达上调，在UC缓解期组织、IBS组织和正常组织等大肠组织表达无明显变化，证明了miR-126参与UC炎症活动过程。.3、IκBα主要在大肠粘膜上皮层细胞表达，在UC活动期大肠组织表达下降，. 在UC缓解期组织、IBS组织和正常组织等大肠组织表达无明显变化。miR-126和IκBα在UC活动期组织表达呈负相关，说明IκBα可能为miR-126调控的靶基因。.4、采用串联PCR技术扩增得到正确的含IκBα基因3′-UTR序列和突变后的IκBα基因3′-UTR序列的目的片段，并成功构建分别含有miR-126结合位点和其突变位点的两种重组质粒PisCHECKTM-2IκBα和PisCHECKTM-2 mutIκBα。通过双荧光素酶报告系统分析测定发现，在转染克隆有IκBα基因3’-UTR质粒实验中，miR-126组荧光素酶活性明显受到抑制，分别与空白组及阴性对照组比较，差异有显著性，但在miR-126与miR-126inhibitor共转染组中，荧光素酶活性抑制效果被解除。. 综上所述，IκBα基因可能是miR-126潜在靶基因，miR-126可通过下调IκBα mRNA的表达，参与UC的炎症活动。本研究为IBD与MicroRNA关系研究提供理论基础和研究方法。同时进一步研究IBD中miR-126增高的原因，了解其机制，为MicroRNA干预性治疗IBD提供理论依据。