磷脂爬行酶1抑制HBV复制的分子机制研究

Chronic HBV infection causes hepatitis, even liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma(HCC).Few effective treatments have been developed.The mechanism of HBV infection is not yet clear. Previous study in our lab have showed the interaction between PLSCR1 and HBsAg and the antiviral activities against HBV by PLSCR1 proteins in vitro and vivo. Such results suggest that PLSCR1 might play the important roles in HBV infection. In this study, we will further study to validate the involvement of PLSCR1 in HBV replication. Then to clairify the molecular machanism of the inhibition of HBV replication by PLSCR1,we will study the effects of PLSCR1 on HBV replication cycles,HBV replication pathways and host cellular functions, and also study the effects of the interaction between PLSCR1 and HBsAg on HBV replication.In conclusion, our study will provide the new insight into the machanism associated with HBV-host iteractions. Furtheremore, our study will facilitate the development of novel anti-HBV therapeutic strategies.

HBV感染可导致肝炎、肝硬化和肝细胞癌，目前无特效治疗药物,关键问题在于HBV感染致病机制不清楚。本实验室前期研究结果显示磷脂爬行酶1（PLSCR1）与HBsAg具有相互作用，且在体内外具有显著的抑制HBV复制的作用，提示PLSCR1在HBV感染中具有重要作用。本项目拟在前期工作基础上，深入研究PLSCR1与HBV复制的关系，并通过研究PLSCR1对HBV复制周期的影响、对细胞功能以及HBV相关细胞信号通路的影响、与HBsAg相互作用对HBV感染复制的影响等，揭示PLSCR1调控HBV复制的分子机制，为研究HBV宿主相互作用奠定基础，为临床HBV治疗提供新的思路。该研究对于阐明HBV感染致病机理、促进新型抗HBV药物研发具有重要的科学价值和现实意义。

本课题根据前期研究结果，采用多种药理、分子生物学手段进一步确证PLSCR1与HBV复制的关系，并揭示PLSCR1抑制HBV复制的分子机理。首先研究PLSCR1与HBV复制的关系，本课题研究发现PLSCR1在HBV阳性细胞中表达显著低于HBV阴性细胞、且在HBV1.3瞬时转染HepG2细胞中表达降低具有时间依赖性；进一步在细胞内高表达PLSCR1，发现在HBV1.3瞬时转染HepG2细胞及Huh7细胞中可显著降低细胞培养液及细胞中HBsAg、HBeAg、HBV DNA的表达水平以及降低细胞内HBcAg的表达水平；在IFN处理HBV1.3瞬时转染细胞采用PLSCR1 siRNA发现可抑制IFN的抗HBV作用；应用HBV小鼠水动力模型评价发现PLSCR1在体内具有抑制HBV复制的作用，通过以上结果，本课题进一步深入确证了PLSCR1与HBV复制的关系。.在阐明PLSCR1抑制HBV复制的分子机制方面，本课题首先研究了PLSCR1的亚细胞定位，发现大部分PLSCR1在细胞浆/膜中表达，只有少量表达在细胞核中，对细胞功能的研究结果显示高表达PLSCR1对HepG2细胞的细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡以及对HepG2细胞释放LDH均无显著影响；对HBV生命周期的影响检测结果显示主要抑制了HBV的DNA和RNA水平，进一步研究显示PLSCR1可抑制HBV的启动子活性，提示PLSCR1主要抑制了HBV的复制阶段；对信号通路的研究结果显示PLSCR1一方面可能通过影响IFN诱导的Jak/stat信号通路抑制HBV的复制，另外还可能通过影响了HBV复制关键转录因子PPARA的表达抑制HBV启动子活性从而抑制HBV的复制，进一步通过表达谱芯片技术筛选并经验证还发现PLSCR1可能通过影响固有免疫识别受体TLR9影响HBV的复制。PLSCR1与HBsAg相互作用研究结果显示PLSCR1可能通过其31-156AA位置与HBsAg结合，高表达PLSCR1可促进细胞对HBsAg的粘附，提示PLSCR1可能在HBV感染进入过程中也具有重要作用。.上述研究结果确证了PLSCR1对HBV的抑制作用，并全面阐明了PLSCR1抑制HBV复制的分子机制，对于进一步研究PLSCR1生物活性以及抗HBV药物的开发有重要意义。