旋毛虫副肌球蛋白对抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用的影响及其机制研究

Paramyosin is an antigen from T. spiralis developed by author and patented in China. The results demonstrated that rTsPmy was not only regarded as a potential vaccine candidate, but also expressed important funtions in immune evasion. In this study, the immunoregulation of TsPmy acting as the Fc receptor for human IgG will be revealed. The rTsPmy binding to the human IgG and the Fc region of IgG are elucidated using ELISA and Pull-Down techniques. Consequently, the native TsPmy binding to the Fc region of IgG is determined. Finally, the effect of the rTsPmy on ADCC-mediated killing and the mechanisms are evaluated. The research is hopeful to reveal the molecular mecahnism of immune evasion of T. spiralis from a perspective. And the work is also helpful to further illustrate the protection mechanism of TsPmy used as a vaccine candidate and provide the scientific the theoretical basis for screening the vaccines and prevention and control against trichinellosis.

旋毛虫副肌球蛋白(TsPmy)是申请者首次发现并获国家发明专利授权的抗原蛋白。研究证实，该蛋白不仅可作为抗旋毛虫病疫苗的候选抗原，也可作为免疫调节分子，参与虫体的免疫逃避。本研究拟从TsPmy作为IgG Fc受体的角度，进一步研究其免疫调节功能。研究采用ELISA、Pull-Down和免疫荧光等方法，明确旋毛虫重组TsPmy与人IgG的特异结合；确定重组TsPmy和天然TsPmy与IgG Fc段的结合；评价TsPmy 在ADCC体外杀伤旋毛虫中的作用。本研究将明确TsPmy作为IgG Fc受体的可能性，探究并证实TsPmy对ADCC体外杀伤虫体的影响，从新的视角揭示旋毛虫免疫逃避的分子机制。将有助于深入阐明TsPmy作为疫苗候选抗原的免疫保护机理，为抗旋毛虫病疫苗的筛选和疾病的防控提供更科学的理论依据。

旋毛虫病是由旋毛虫引起的一种常见的食源性人兽共患寄生虫病，对人类健康、畜牧业生产和食品工业造成严重威胁。旋毛虫副肌球蛋白（TsPmy）不仅可作为抗旋毛虫病疫苗的候选抗原，也可作为免疫调节分子，参与虫体的免疫逃避。本研究首先采用ELISA法检测人免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM和IgE）与重组TsPmy的结合情况，结果仅有IgG与重组TsPmy可结合，其他免疫球蛋白均不与重组TsPmy结合。为进一步验证二者结合的特异性，本研究采用Pull-Down的方法，将重组TsPmy固定在His磁珠上，作为“诱饵”蛋白，捕获可与其特异性结合的免疫球蛋白分子，进一步用洗脱剂将蛋白复合物洗脱下来，经SDS-PAGE电泳和转膜，进行Westnblot鉴定。结果仍显示重组TsPmy仅与人IgG具有亲和力。为了对重组TsPmy与人IgG结合的区域进行定位，本研究也通过ELISA和Pull-down的方法，明确重组TsPmy与人IgG的Fc段可以结合，不与IgG的Fab段结合。免疫荧光结果显示，虫体天然TsPmy可与虫体体表天然Pmy可也可与IgG Fc段结合。通过体外杀伤实验，结果初步表明分析封闭虫体体表TsPmy对免疫血清介导的ADCC体外杀伤作用有影响。本研究明确TsPmy可作为IgG Fc的受体，对ADCC体外杀伤虫体有一定的影响，从新的视角揭示旋毛虫免疫逃避的分子机制。将有助于深入阐明TsPmy的免疫保护机理，为旋毛虫病的的防控提供更科学的理论依据。