唾液中rhEPO、rhGH快速检测的研究

采用SELEX技术，筛选只与外源性EPO具有高特异性、高亲和性的寡核苷酸配基，以及分别与内源性、外源性GH具有高特异性、高亲和性的寡核苷酸配基，以这些配基作为探针，采用一种适用于生物亲和反应检测的新型信号放大电化学方法，以三联吡啶钌为电化学信号物，草酸钠为信号放大剂，有效避免常规电化学的缺陷，检测唾液中外源性EPO的含量和22kDa GH的相对丰度，可以极大地提高探针检测EPO、GH的灵敏度；制备电化学试纸条，将常规试纸条快速、低成本的优势与电化学定量、灵敏的特点相结合，用于唾液rhEPO、rhGH的检测，是兴奋剂检测的发展方向。本研究以唾液为检测样本，取样方便；采用电化学检测方法，灵敏度高；采用电化学试纸条，简便快速；将为肽类激素的检测提供更灵敏、更快速的直接检测方法，对提高我国兴奋剂检测的国际地位，具有重要而深远的意义。

本研究立足于现有的促红细胞生成素（EPO）和人生长激素（hGH）检测思路和方法，将配体指数级富集系统进化技术（SELEX）用于兴奋剂检测中。采用SELEX技术，筛选出与以rHuEPO-α为代表的外源性EPO具有高特异性、高亲和性的寡核苷酸配基。利用这一特异性寡核苷酸配基做为探针，采用毛细管电泳-激光诱导荧光检测技术，实现对外源性EPO在纳摩尔水平的检测，在血液和尿液中验证该方法的有效性，探讨寻找更好的样品前处理手段，尝试利用金纳米粒子标记适配体光学探针，努力实现对外源性EPO在皮摩尔浓度的检测。研究中发现由于外源性rhGH与内源性hGH的22kD亚型在结构上基本相同，对其特异性寡核苷酸配基的筛选工作遇到困难。建立EPO和hGH使用者血液、尿液和唾液样本的采集及保存的标准程序，初步探讨各类样本的检测前处理方法，为进一步对比利用上述样本进行兴奋剂检测的可靠性及适用性奠定了基础。