整合素CD103：同种胰岛移植排斥反应治疗的新靶点

我们前期应用基因敲除和免疫毒素靶点清除CD103表达细胞的研究证明CD103/E-Cadherin信号途径在促进同种胰岛移植排斥反应中发挥关键作用，但是上述两种方法在实际应用中存在缺陷，我们将继续寻找新的方法更加有效的阻断CD103/E-Cadherin信号途径，从而阻止同种胰岛移植排斥反应。本课题将采用杂交瘤技术制备出识别不同表位和不同类型的小鼠CD103单克隆抗体，通过流式细胞技术从中筛选出具有清除CD103表达细胞的能力的抗体，再利用这些抗体清除CD103表达细胞以阻断CD103/E-Cadherin信号途径，观察阻断该信号途径对同种胰岛移植排斥反应的影响。在此基础上，研究清除性CD103 单克隆抗体阻止同种胰岛移植排斥反应的作用机制，为临床抗体药物治疗胰岛移植排斥反应提供理论依据。

我们前期应用基因敲除和免疫毒素靶点清除CD103表达细胞的研究证明CD103/E-Cadherin信号途径在促进同种胰岛移植排斥反应中发挥关键作用，但是上述两种方法在实际应用中存在缺陷，我们将继续寻找新的方法更加有效的阻断CD103/E-Cadherin信号途径，从而阻止同种胰岛移植排斥反应。采用目的蛋白CD103多肽片段免疫小鼠，应用杂交瘤技术制备出识别不同表位和/或不同类型的单克隆抗体，我们制备出21株CD103单克隆抗体，ELISA结果表明，他们能与目的蛋白相结合。接下来我们将这些抗体分别标记FITC荧光素，应用流式细胞术检测CD103单抗体外识别细胞表面抗原的能力，结果有三株抗体与商业化的CD103抗体有相似的作用，但均缺乏体内杀伤CD103表达细胞的功能，因此制备CD103单抗的实验陷入困境。为了克服这一困难，课题组根据抗体-药物偶联物（antibody-drug conjugates，ADCs）最新进展，将商业化的CD103单抗（M290）与多种小分子毒素（暂定MMAE、MMAF和DM1）偶联，拟定制三种ADC候选药物，这三种药物将于2013年2月中旬获得小样本，届时我们将进行C57BL/6小鼠的体内注射实验以验证该药物的体内杀伤CD103表达细胞的能力，从中筛选出一种最佳的药物，进一步将其用于胰岛同种移植模型，验证阻断CD103/E-Cadherin信号途径能否有益于同种胰岛移植物的存活并研究潜在的免疫保护机制，为开辟新颖的治疗靶点提供科学理论依据。