基于核酸适配体的酶分子检测法

本项目拟建立一种基于核酸适配体的检测酶分子的新方法，发挥核酸适配体在制备和稳定性等方面的优势，同时结合待测酶分子的催化反应活性，提高检测的灵敏度和特异性。研究工作将以具有重要生理意义的中性粒细胞弹性蛋白酶为检测对象，通过几种不同的检测平台来开展。利用链霉亲和素和生物素之间的相互作用，将生物素标记的可特异性识别中性粒细胞弹性蛋白酶的核酸适配体固定在链霉亲和素修饰的磁性微球，酶标板，或色谱柱上，核酸适配体从样品中选择性地捕获目标酶分子，加入可产生荧光产物的底物，通过酶分子的催化放大和高灵敏度的荧光检测，将实现对目标酶分子的高特异性和高灵敏度检测，进一步将其应用于实际样品测定。该检测方法将克服基于免疫抗体方法的局限性，实现酶生物标志物的高灵敏检测，在临床诊断和医学研究等领域具有重要意义。

一些酶分子是重要的生物标志物，灵敏检测酶分子在疾病诊断和基础研究中具有重要的意义。充分发挥核酸适配体的优势，利用核酸适配体的高亲和力和特异性和酶催化反应的选择性与信号放大特性，本项目发展了一种新颖的基于核酸适配体的酶分子检测方法。将核酸适配体固定到固相基底（磁球或微孔板）上，适配体特异性捕获富集待测的酶分子，捕获到的酶分子选择性催化水解底物产生产物，通过检测产物实现对待测酶分子的高灵敏和高特异性检测。研究工作中选取凝血酶和弹性蛋白酶等酶分子作为目标分子，建立了高灵敏、高特异的检测方法，并实现了在复杂样品如血清中凝血酶和弹性蛋白酶的检测。利用适配体亲和捕获富集，酶反应放大，采用荧光底物时，分别实现了对2 fM 凝血酶或20 fM弹性蛋白酶的检测。所建立的方法可以用于制备简便的检测试剂盒，便于实际应用，所发展的方法将有利于疾病诊断和基础研究中对一些目标酶分子的检测。