肝细胞癌中Aurora-A基因过表达的转录后水平分子调控机制研究

Aurora-A是新近发现的丝氨酸/苏氨酸激酶新家族一个重要分子，在肝细胞癌等多种恶性肿瘤中均呈高表达状态。课题组前期研究表明：Aurora-A基因的表达水平与肝细胞癌患者的临床分期、淋巴结转移及其预后密切相关，阻断其表达可有效逆转肝癌细胞恶性生物学表型，显示了其作为肿瘤生物治疗靶点的潜在应用价值。在前一个基金资助下，我们系统地分析了肝细胞癌中Aurora-A基因过表达的转录水平分子调控机制，但是否存在转录后水平(microRNA)分子调控机制仍不清楚，本课题拟在前期工作基础上利用生物信息学方法初步分析Aurora-A基因3'-非编码序列(UTR)中可能结合的所有microRNA分子，分别从细胞和组织水平筛选并验证肝细胞癌中诱导Aurora-A基因过表达的关键microRNA分子标签，为进一步阐明和完善肝细胞癌中Aurora-A基因表达水平升高及其功能异常的分子调控机制提供实验依据。

Aurora-A是新近发现的丝氨酸/苏氨酸家族一个重要分子，前期的研究结果均表明：Aurora-A基因的过表达与肝癌发生、发展、预后及化疗耐药密切相关。然而，Aurora-A基因在肝癌细胞中过表达的分子调控机理尚未系统阐明。本课题组在前一个国家自然科学青年基金资助下从转录水平证明了HIF-1α是肝细胞癌中Aurora-A表达激活的一个重要因子，但是否存在Aurora-A过表达转录后水平分子调控机制仍不清楚。本课题分为以下几个部分进行：（一） 组织学水平检测Aurora-A基因mRNA和蛋白表达水平并分析Dicer1表达变化对肝癌细胞中Aurora-A蛋白表达的影响，初步推断：miRNA参与了肝癌细胞中Aurora-A过表达的转录后分子调控；（二）生物信息学分析Aurora-A基因3’-UTR中可能结合的miRNA位点，结果发现： Aurora-A基因3’-非编码末端序列共含有16个可能miRNA结合位点，其中包括miR-129-3p；（三）组织学水平分析了miR-129-3p表达的临床病理意义及其表达与DNA甲基化之间的关系，结果发现：启动子甲基化是miR-129-3p表达下调的一个重要分子机制，且miR-129-3p表达下调与患者临床分期及淋巴结转移状及预后密切相关；（四）功能学试验结果表明：miR-129-3p表达上调可以抑制肝癌细胞增殖、逆转肝癌细胞的EMT表型并显著抑制肝癌细胞体内外侵袭转移活性；（五）荧光素酶活性及RIP等试验证明Aurora-A是miR-129-3p下游调控的一个直接靶基因；（六）深入阐明PI3K/Akt 和p38-MAPK信号通路激活是参与肝细胞癌中miR-129-3p/Aurora-A表达紊乱的下游重要分子机制。在本项目资助下，已发表2篇SCI收录论著和4篇SCI收录综述；另外一篇SCI收录论著目前在修改过程中，《Gastroenterology》(Major revision)。