HBx调控c-kit基因过表达在肝细胞癌EMT中作用机制的研究

HBx, an important gene in HBV, mediates EMT in hepatocellular carcinoma (HCC) and plays a harmful role on human health. The factors of Tyrosine Kinase Family could be actived by HBx and thus promote EMT of HCC, However, the mechanism is not clear. The c-kit gene belongs to Receptor Tyrosine Inase Family and acts as a key factor in invasion and metastasis of tumors. Our preliminary study showed that HBx over-expression could significantly increase c-kit gene expression. In addition, c-kit expression was found to have a positive correlation with HBx in tissue samples of HCC. KIT protein activation or c-kit gene mutation were also observed in most of the HBV-induced HCC. Therefore, we hypothesized that HBx may up-regulate c-kit expression and activate KIT/SCF signaling pathways, thereby leading to persistent activation of receptor tyrosine kinase signaling pathways and consequently promotion of EMT in HCC. Several approaches such as gene transfection, RNA interference and animal in vivo experiments will be untilized in this study, in order to find out the possible mechanism by which HBx regulates c-kit over-expression involved in EMT of HCC. This study may help to clarify the possible underlying mechanisms of HBV promoting invasion and metastasis of HCC.

HBx是乙肝病毒在人体发挥危害作用的重要基因，其导致的上皮间叶样转化（EMT）在肝细胞癌侵袭转移过程中发挥重要作用。受体酪氨酸激酶家族相关因子可被HBx活化并促进肝细胞癌发生EMT，机制尚不清楚。c-kit基因是受体酪氨酸激酶家族的关键因子，在肿瘤侵袭转移机制中起重要作用。我们研究显示：肝癌组织标本检测中发现c-kit基因表达与HBx表达呈正相关；通过过表达HBx可显著上调c-kit表达；多数HBV相关性肝癌存在c-kit基因突变和KIT蛋白的活化。故我们推测HBx可能通过激活c-kit启动子或诱导c-kit突变，上调c-kit基因表达，持续激活受体酪氨酸激酶信号通路，使肝细胞癌发生EMT。本研究采用质粒构建、基因转染、RNA干扰、动物活体实验等方法，旨在探讨这一可能的机制，研究其具体作用位点和突变形式，并进行相关抑制手段干预。该研究有助于深入理解乙肝病毒促进肝细胞癌侵袭转移的作用机制。

肝细胞癌是我国常见的恶性肿瘤。目前对肝细胞癌的治疗主要基于外科手术切除联合术后药物治疗，术后病灶复发和转移是影响其预后的关键因素，但使用相关药物对肝细胞癌复发、转移作用有限，因此研究肝细胞癌复发和转移机制并进行相应干预对提高肝细胞癌治疗效果有重要意义。乙型肝炎病毒是我国肝细胞癌主要致病因素，乙肝病毒X基因（Hepatitis B Virus x Gene, HBx）与肝细胞癌复发和转移关系密切相关。HBx蛋白可以激活多个与肿瘤侵袭转移相关的原癌基因及转录因子，促进肝细胞癌的复发和转移。我们的相关研究发现HBx可诱导肝癌细胞发生上皮-间叶样表型转化（Epithelial-Mesenchymal Transition, EMT），增强肝癌细胞侵袭能力，但机制需进一步研究。c-Kit基因是具有多向分化潜能的肝脏卵圆细胞及肿瘤干细胞的重要标志物，同时在恶性肿瘤发生及侵袭转移机制中发挥重要作用，其在肝细胞癌袭转移机制中的作用尚不清楚，与乙肝病毒相关基因的关系目前未见报道。因此研究HBx对c-kit 基因调控机制以及其对肝细胞癌侵袭转移性的影响，有助于阐明乙肝病毒影响肝细胞癌侵袭转移的作用机制。本研究通过对临床数据分析、细胞学实验和裸鼠体内实验，证明：1）HBx与c-Kit蛋白在肝细胞癌中过表达，表达水平与肿瘤分期、血管侵袭正相关，与患者预后负相关；2）HBx基因通过激活c-kit使其过表达，激活KIT/SCF通路，影响下游促进EMT相关蛋白表达及信号通路（PI3K/AKT等）激活，增强肝细胞癌侵袭转移能力。通过对KIT/SCF信号通路进行干预，抑制该信号通路激活，可以抑制肝细胞癌侵袭转移能力；3）通过建立裸鼠脾脏-肝脏肝细胞癌转移模型，证明HBx可通过c-Kit在肝细胞癌中诱导EMT表型变化从而导致肝细胞癌在体内侵袭性增强并发生远处转移；4）在完成以上研究基础上，我们进一步研究了局部粘着斑激酶(Focal Adhesion Kinase, FAK)对肝细胞癌的影响，并发现其可与KIT蛋白在肝癌细胞中可发生特异结合，为进一步研究打下基础。本课题研究了HBx基因通过调控c-kit基因诱导肝细胞癌发生EMT在肝癌侵袭转移性中的机制。有助于深化理解乙肝病毒与肝细胞癌侵袭转移性的作用机制。为肝细胞癌寻找一种可能的评估预后的指标，并且为寻找干预乙肝相关性肝细胞癌侵袭转移的新靶点提供帮助。