Serglycin调控TGF-β信号通路诱导EMT促进膀胱癌转移机制研究

Bladder cancer is one of the most common malignant cancers in China, metastasis and recurrence are the majour causes of patients's death. Our previous study found that the abnormal expression of Serglycin is associated with invasion and meatastasis of bladder cancer. Based on this finding, we propose to investigate the mechanism of Serglycin in bladder cancer invasion and metastasis.We will use.RT-qPCR and IHC to evaluate the expression of Serglycin in bladder cancerous tissues and assess its association with clinical pathological features. We will up- or down-regulate the expression of Serglycin the in bladder cancer cells, then use MTT, migration and invasion assay to analyze the effect of Serglycin on cell proliferation, migration and invasion in vitro.We will constructe bladder cancer nude-mouse model, and evaluate the effect of Serglycin on tumor growth, invasion and metastasis in vivo.We will use molecular biology experiments to verification Serglycin for TGF-β signaling pathway mediated EMT of bladder cancer invasion and metastasis.

膀胱癌是我国的常见恶性肿瘤之一，膀胱癌的转移与复发是病人的主要死因。在前期研究中我们发现膀胱癌中Serglycin的表达上调与远处转移显著相关。因此，本项目拟在此基础上进一步探讨Serglycin在膀胱癌转移中的作用机制：通过RT-qPCR、IHC检测膀胱癌组织中Serglycin的表达，分析其与临床病理特征的相关性；上调或下调膀胱癌细胞的Serglycin表达水平，然后采用MTT、迁移及侵袭实验研究其对细胞增殖、迁移及侵袭活性的影响；构建裸鼠原位膀胱癌模型，研究Serglycin过表达对肿瘤体内生长、侵袭与转移的作用；通过酵母双杂交、免疫共沉淀及基因表达芯片技术分析Serglycin在膀胱癌中的调控通路；通过分子生物学实验验证Serglycin对TGF-β信号通路介导的EMT及膀胱癌侵袭、转移的调控作用。

膀胱尿路上皮癌在我国泌尿系恶性肿瘤中最常见，肿瘤多发和复发率高是其临床特点，也是病人的主要死因。丝甘蛋白聚糖(Serglycin)是一种小分子蛋白聚糖家族，由SRGN基因编码的核心蛋白和丝甘氨酸重复序列和各种GAG链修组成。近年来发现Serglycin和一些人类肿瘤相关。本研究通过RT-qPCR、IHC检测膀胱癌组织中Serglycin的表达，分析其与临床病理特征的相关性；利用Serglycin shRNA慢病毒下调膀胱癌细胞的Serglycin表达水平，然后采用MTT、迁移及侵袭实验研究其对细胞增殖、迁移及侵袭活性的影响；构建裸鼠膀胱癌皮下移植瘤模型，研究Serglycin表达下调对肿瘤体内生长、侵袭与转移的作用；通过RNAseq测序技术检测Serglycin表达下调后膀胱癌细胞的表达谱，分析Serglycin参与的调控通路；通过分子生物学实验验证Serglycin对TGF-β信号通路介导的EMT的作用，明确Serglycin对膀胱癌侵袭、转移的调控作用。研究发现，Serglycin mRNA及蛋白表达水平在膀胱癌组织中显著增高，Serglycin高表达与膀胱癌浸润深度、远处转移及患者不良预后显著相关。下调T24、5637膀胱癌细胞中Serglycin表达后，细胞的增殖、迁移及侵袭活性均受到显著抑制。动物实验显示，下调Serglycin表达后，肿瘤生长液受到显著抑制。RNAseq测序结果显示Serglycin表达下调对TGF-β信号通路信号通路相关蛋白表达水平均有不同程度的影响。WB证实Serglycin表达下调后，细胞vimentin表达降低，E-cadherin上调，表明Serglycin表达对EMT具有调控作用。本研究表明，Serglycin通过调控EMT介导膀胱癌的侵袭转移，在膀胱癌的发展中起着重要作用，有望成为膀胱癌治疗生物治疗的新靶点。