oxLDL/sortilin介导的糖尿病肝窦功能障碍的机制研究

Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD)is associated with hepatic sinusiodal dysfunction dysfunction caused by oxLDL in diabetes mellitus(DM). Sortilin is a new receptor for regulation of lipoprotein metabolism, the study shows that sortilin involved in regulating lipoprotein metabolism and atherosclerosis development. Our previous studies have found that the expression of sortilin of LSEC is increased in diabetic hepatic sinusoidal dysfunction, but the mechanism is unknown. In this project, by using diabetic fatty liver disease mice model, to observe the degree of blood fat, insulin,blood flow of hepatic sinusoidal,fenestrae and hepatic sinusoidal dysfunction, and to detect expressions of PLVAP,aSMase,LN , CAV-1、IL-6 and sortilin.By using the knockout and siRNA technology to establish the sortilin -/- mice model of diabetic fatty liver and LSEC sortilin-1 silencing model by LDL induced,we will investigate the mechanisms by which oxLDL in combination with sortilin increased the expression of PLVAP、LN、aSMase、LN and CoIV, activates Rho/ROCK pathway and promotes the occurrence of hepatic sinusoidal dysfunction in hepatic tissue or LSEC at the levels of animal, cell and molecule. The present study will not only contribute to clarify the molecular mechanism of the hepatic microcirculatory dysfunction mediated by sortilin mediated in DM, but also but also provide a theoretical evidence for the discovery of therapeutic target drug in the treatment of diabetic fatty liver.

氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱发的肝窦功能障碍与糖尿病脂肪肝的形成有关。sortilin是一个新的调节脂质代谢的重要因子，介导了肝脏脂肪变性和动脉粥样硬化的形成。我们前期研究发现糖尿病肝窦病变与肝窦内皮细胞(LSEC) sortilin上调有关，其机制尚不清楚，国内外未见报道。本研究利用糖尿病脂肪肝小鼠模型观察血脂、胰岛素、肝窦血流、窗孔的变化及PLVAP、aSMase、CAV-1、IL-6、LN、sortilin表达水平；利用基因敲除小鼠研究sortilin是否通过Rho/ROCK通路介导肝窦功能障碍；利用siRNA技术研究oxLDL/sortilin/ROCK通路对LSEC PLVAP、LN、aSMase、LN、CoIV、ET-1、CAV-1、Rho/ROCK表达及炎症因子的影响。旨在阐明sortilin在糖尿病肝窦病变中的作用机制，为寻找糖尿病合并脂肪肝的靶点药物提供理论依据。

Sortilin（SORT）是新发现的脂质代谢因子，参与糖尿病所致的肝窦功能障碍，但具体机制不清。本项目采用siRNA、WB、流式细胞、硝酸银染色等技术从分子、细胞和动物水平探讨高糖/oxLDL状态下sortilin介导的肝窦功能障碍的分子机制。包括两部分：一、利用糖尿病脂肪肝小鼠模型观察肝脏肝窦基底膜形成、窗孔、PLVAP、sortilin表达的变化特点，利用siRNA研究oxLDL/SORT与RhoA/ROCK/NF-κB通路的关系及对LSEC 贮脂、凋亡、PLVAP、LN、IL-6和TNF-α的影响；二、探讨T2DM合并非酒精性脂肪肝患者血清SORT水平与肝脏脂肪代谢的关系。结果：1、SORT表达于LSECs上，高糖和oxLDL作用下LSECs SORT mRNA和蛋白降低、细胞内脂滴含量增加、脂质清除能力下降。2、SORT参与了高糖和oxLDL诱导的LSECs凋亡，HG+ox-LDL组凋亡率明显增加达26.8%，LV-Sort1过表达组凋亡率为10.4%。3、高糖和oxLDL作用下LSECs 通过SORT上调IL-6和TNF-α的表达，LV-Sort1过表达后IL-6和TNF-α的表达降低。4、高糖作用下PLVAP和LN的表达增加；SORT过表达减少了高糖诱导的LSECs PLVAP和LN的表达；Y-27632与PDTC干预后转染组细胞PLVAP和LN的表达均下降。5、糖尿病性脂肪肝鼠肝组织中SORT的表达显著降低、肝窦基底膜增厚、肝细胞脂肪变性增强。6、T2DM组、NAFLD组、T2DM+NAFLD组血清SORT含量均低于对照组，T2DM+NAFLD组血清SORT含量低于T2DM组和NAFLD组，三组患者肝脏脂肪含量、TG、FBG、HbA1c及HOMA-IR水平均增高。SORT与BMI、FBG、HbA1c、HOMA-IR及肝脏脂肪含量呈负相关，HbA1c 是SORT的独立影响因素；SORT是T2DM合并脂肪肝的保护因素。结论：糖尿病可致肝窦SORT的下调，通过RhoA/ROCK/NF-κB通路上调PLVAP、LN和炎症因子的表达，诱导肝窦内皮细胞凋亡和功能障碍，导致肝脏微循环障碍。SORT的过表达可抑制这种损伤过程，减轻糖尿病肝脏微循环障碍。SORT可能是监测糖尿病患者脂肪肝发生、疗效评估的有效指标和治疗的潜在靶点。