MSC对系统性红斑狼疮中Tfh细胞的调控作用和机制研究

Mesenchymal stem cell(MSC) is a promising method for the treatment of systemic lupus Erythematosus (SLE), which can inhibit Th17 cell and promote Treg cell. Follicular helper T cell(Tfh) mainly helps B cell proliferation,differentiation and antibody secretion.Our previous study showed that the percentage of Tfh cells and IL-21 production are increased in SLE, which are closely related to the auto-antibody level and the disease activity of SLE. Tfh cell plays an improtant role in pathogenesis of SLE. However, the regulatory role of MSC on Tfh cells is unknown. Here, we aim to explore the regulatory effect and mechanism of MSC on Tfh cells during the treatment of lupus. Lupus-prone MRL/lpr mice are used in our research. Firstly, the regulatroy function and mechanisam of MSC on Tfh in vivo and in vitro are analyzed; Secondly, the effect of MSC on Tfh cell-mediated B cell differentiation and antibody production is researched. This study can help us to make clear the role and mechanism of MSC regualting Tfh cells, and extend our understanding of mechanism for using MSC treatment of lupus.This study can provide theoretical foundation for chosing Tfh cell as therapeutic target and MSC as a new therapeutic method for SLE.

间充质干细胞(MSC)对系统性红斑狼疮（SLE）的治疗具有较好的应用前景，现有研究提示其可通过抑制Th17和促进调节性T细胞发挥对狼疮的治疗作用。滤泡辅助性T细胞（Tfh）是一群以辅助B细胞增殖、分化和抗体分泌为主的T细胞，我们前期研究表明SLE中Tfh比例升高，其分泌的IL-21含量增加且与自身抗体滴度和病情活动度密切相关，在狼疮的发病中具有重要的作用，但MSC对Tfh的作用和机制尚未清楚。本课题旨在探索MSC治疗狼疮过程中对Tfh分化及功能的调控作用和机制。本课题拟采用MRL/lpr狼疮鼠模型，1）研究MSC对体内外Tfh的调控和机制；2）明确MSC对Tfh介导的B细胞分化和功能的影响。本研究可明确MSC对Tfh细胞的调控作用及机制，扩展我们对MSC治疗狼疮免疫学机制的认识，为临床以Tfh细胞为靶标和以MSC为新方法的SLE治疗提供理论基础。

本研究基于骨髓间充质干细胞（BM-MSC）的免疫调节作用在自身免疫性疾病中广泛应用的背景和发展前景，基于我们对滤泡辅助T淋巴细胞的前期研究，进一步借助MRL/lpr狼疮鼠明确骨髓间充质干细胞（BM-MSC）对MRL/lpr狼疮鼠体内外Tfh细胞及B细胞分化和功能的影响，明确BM-MSC通过调控Tfh细胞及B细胞发挥在狼疮治疗中的重要作用，可为临床SLE的治疗提供一定的实验室研究基础。在本研究中，我们建立B6鼠来源的骨髓间充质干细胞（BM-MSC）的分离、纯化及培养方法，可获得稳定形态和表型的BM-MSC细胞，操作方法可形成标准化的流程。进一步证实BM-MSC 可明确抑制CD4+T细胞的增殖，抑制体外Tfh细胞的分化和增殖，并存在剂量依赖关系；BM-MSC能明显抑制Tfh细胞分泌IL-21，明显抑制Tfh细胞中IL-21mRNA的表达，同时也能够抑制Tfh细胞中重要的转录因子Bcl-6、STAT3和p-STAT3的表达。在BM-MSC对Tfh细胞的调节过程中，细胞细胞接触抑制的作用较细胞因子分泌的抑制作用更为明确。此外，我们进一步证实Tfh细胞与MSC的共培养上清和MSC预处理后的Tfh细胞对B细胞存在一定的免疫调节作用，即BM-MSC可通过Tfh细胞发挥对B细胞的调节作用。最后，我们将体外培养的BM-MSC通过尾静脉注射输注至MRL/lpr狼疮鼠体内，结果提示BM-MSC输注治疗可明确延长MRL/lpr狼疮鼠的存活率，能明显降低血清中IL-21的含量及外周血中IL-21mRNA的表达、减少MRL/lpr狼疮鼠24小时尿蛋白量，降低MRL/lpr狼疮鼠脾脏中CD4+CXCR5+PD-1+Tfh细胞比例、脾脏指数及抗ds-DNA抗体水平。综合提示BM-MSC可作为一种治疗狼疮的新选择。