磷脂酶C-γ活化与蛋白激酶B关联及对胃癌细胞调控作用研究

磷脂酶C-γ（PLC-γ）因其在肿瘤内高表达而可能成为肿瘤治疗新靶点，明确其作用机制有助于临床治疗。我们前期结果显示胃癌细胞内PLC-γ表达与生长相关；其与蛋白激酶B（Akt）共定位且结合；Akt磷酸化PLC-γ使其活化。结合以往有关PLC-γ研究资料推测：胃癌细胞内① Akt与PLC-γ的Z区域结合使其活化；②PLC-γ被Akt活化后促进细胞生长/迁移或抑制凋亡；③PLC-γ的Z区域缺失体或磷酸化位点突变体转染可反向调控细胞功能并抑制瘤体生长。为证实之，采用WB、CoIP和PCR等技术，①构建相关表达载体转染至胃癌细胞和HEK293T细胞，内外源判定PLC-γ结合Akt区域、磷酸化位点及对胃癌细胞调控；②检测胃癌细胞被诱导生长/凋亡时Akt调控PLC-γ意义；③观察缺失体/点突变表达载体对胃癌细胞功能调控；④筛选稳转缺失体/点突变载体细胞株并裸鼠成瘤观察变化，藉此阐明PLC-γ作用机制。

磷脂酶Cgamma(Phosphoinositide-specific phospholipase Cγ, PLCγ) 含PLC-γ1和PLC-γ2两亚类, 特有两个SH2(Src homology)区域,　一个SH3区域和分割两边的PH（Pleckstrin homology）区域构成的Z区域，因而具有不同于PLC其他亚型的作用机制。已有研究显示PLC-γ在部分肿瘤（乳腺癌等）内高表达而可能成为肿瘤治疗新靶点，因此明确其在胃癌中作用机制可为其成为临床治疗胃癌新的切入点提供理论依据。我们以不同分化程度的胃癌（腺癌）细胞（BGC-823与SGC-7901）与临床标本为研究对象，并结合裸鼠模型，探讨（1）PLC-γ在胃癌组织与细胞中的表达、自身分子结构与基本信号调节网络对胃癌细胞增殖与迁移等作用的调控；（2）在此过程中PLC-γ与蛋白激酶B（PKB/Akt）、细胞外信号调节激酶（ERK）、核因子（NF-κB）之间的相互关系。获得的主要研究成果（1）PLC-γ在具有淋巴结转移的胃癌组织中高表达并强于Akt，PLC-γ的Y783位点磷酸化是其调节细胞迁移的关键，阻断PLC-γ表达可有效抑制胃癌细胞迁移；Z区域的C端SH2在PLC-γ的活化过程与调节细胞迁移中发挥重要作用；IP3/CamK II与DAG/PKCδ信号轴不同程度参与PLC-γ调节胃癌细胞迁移过程。（2）胃癌细胞中PLC-γ与Akt不存在相互结合，但是两者存在一定的相互调节机制，在不同的细胞活动中相互抑制/促进（loop）。（3）PLC-γ与Akt均参与黄连素诱导的胃癌细胞凋亡过程，黄连素可通过抑制Akt/mTOR/pS6K/S6与PLC-γ/caspase3信号轴促进胃癌细胞凋亡。（4）活化的PLC-γ可以激发包括ERK/MMP2/9与NF-kappaB/MMP2途径在内的调节肿瘤细胞迁移的信号网络；Akt作为上游调节者激发PLC-γ/ERK/MMP2/9等与细胞迁移相关的信号通路。（5）构建了PLC-γ的ShRNA的稳转细胞株，皮下成瘤观察到静默PLC-γ可以有效抑制胃癌肿瘤生长，但并不能明显抑制胃癌细胞向淋巴结中的转移，推测可能与动物的复杂内环境有关。藉此，我们提出：PLC-γ是调控胃癌细胞活动的关键信号分子之一，尤其是与胃癌淋巴结转移的密切关联为使其可成为临床上检测与治疗胃癌转移的待选分子靶点提供了依据。