circRNA_000681与miR-126构成ceRNA网络靶向调控内皮细胞凋亡与深静脉血栓形成的作用和机制

Deep vein thrombosis (DVT) is of great harm and unclear pathogenesis, in which apoptosis of endothelial cells play a crucila role. Our previous research showed that: over-expressed miR-126 in DVT rat model could reduce endothelial cells apoptosis and decrease thrombosis formation, whereas the regulating relation of miR-126 is still unknown. Based on MREs pairing rules, we adopt starBase and CIRCpedia to predict that circ_000681 may act as a sponge of miR-126 through ceRNA mechanism, removing the inhibition of miR-126 on target genes and regulating endothelial cells apoptosis and DVT. Based on previous research, the current project plans in vivo and vitro, to screen and validate differentially expressed circRNA through circRNA microarray, DAVID and RT-PCR; analyze circRNA/miRNA interaction using RNA-FISH and Luciferase Assay; construct circRNA/miRNA/mRNA/protein regulation network by RNA-RIP and RNA-ChIP, providing basis of molecular regulation and targeted therapy for DVT.

深静脉血栓（DVT）危害大，发病机制不清，内皮细胞凋亡在DVT发生中起关键作用。我们前期发现：过表达miR-126可抑制DVT大鼠内皮细胞凋亡，减少血栓形成，但miR-126在转录后的上下游调控关系并不清楚。基于应答原件序列配对，我们利用starBase和CIRCpedia，预测环状RNA circ_000681可能通ceRNA机制，充当miR-126的海绵，解除miR-126对靶基因的抑制，调控内皮细胞凋亡与DVT。在前期基础上，本项目拟在临床、动物和细胞中，通过circRNA芯片、DAVID和RT-PCR确定DVT内皮细胞差异表达的circRNA；利用RNA-FISH和Luciferase Assay进行circRNA/miR-126互作分析；利用RNA-RIP和RNA-ChIP构建circRNA/miR-126/mRNA/protein调控网络，为DVT的分子调控和靶向治疗提供依据。

深静脉血栓（Deep Venous Thrombosis，DVT）具有高发病率、高死亡率和高漏诊率的特点，由此导致的致命性肺栓塞是骨科大手术后非预期死亡的主要原因之一。在本项目中，我们从DVT临床样本中提取总RNA，筛选出DVT较健康对照中表达差异最为显著的hsa_circ_0001020作为研究对象，探究了hsa_circ_0001020在DVT形成中的作用及潜在机制。我们发现：在DVT患者和小鼠模型中，hsa_circ_0001020和MDM2表达上调，而miR-29c-3p表达下调。Hsa_circ_0001020海绵miR-29c-3p，以促进MDM2表达，抑制内皮祖细胞迁移、侵袭和血管形成。随后，通过hsa_circ_0001020的功能缺失实验和挽救实验验证了hsa_circ_0001020的功能和调控机制。在DVT小鼠中，hsa_circ_0001020敲低可抑制血栓形成，并促进内皮祖细胞向血栓的归巢能力。我们的实验发掘了一个在DVT中表达的新的circRNA，并首次证明了hsa_circ_0001020在DVT中的潜在调控机制。这些结果证明了hsa_circ_0001020作为DVT诊断和治疗生物标志物的潜在作用，并为DVT发病机理中的RNA调控机制提供实验依据。