Nrf2在小鼠深静脉血栓形成过程中的调控作用及机制研究

Deep vein thrombosis (DVT) is a major cause of morbidity and mortality worldwide. There are reports indicated that oxidative stress promotes DVT. Nrf2 is the central regulator of cellular antioxidant response. Take into account our previous discovery that Nrf2 activation was accompanied with DVT alleviation in mice, we hypothesize activating Nrf2 could inhibit DVT by enhancing antioxidant response. In this study, we intend to verify this hypothesis. DVT model will be established in WT mice, Nrf-KO mice, and Nrf2 agonist treated WT mice. The evolvement of endothelial cell activation, platelet aggregation, leucocyte recruitment, and neutrophil NETosis will be compared between different groups to elaborate the regulatory roles of Nrf2. Experiment will also be carried out in Nrf-KO and Actb-GFP parabiosed mice to further reflect the specific Influence of Nrf2 defection on endothelial cells, platelets, and leucocytes. In the meantime, the present study will detect the dynamics of abovementioned parameters. Subsequently, correlation analysis will be made between the results and thrombus age to identify candidate biomarkers for future study of venous thrombus age estimation.

深静脉血栓形成（DVT）发病率、致死率高。有研究表明DVT的发生与氧化应激密切相关。Nrf2是抗氧化应激中枢调节因子。我们前期研究发现激活Nrf2抑制小鼠DVT，推测其作用是通过抗氧化应激实现的。本项目拟应用Nrf2-KO鼠、Nrf2激动剂处理鼠与WT鼠建立DVT模型，观察Nrf2缺失及激活对内皮细胞激活、血小板聚集、白细胞募集、NETs形成等进程的影响，探讨Nrf2调控DVT发生的作用及机制。并结合使用Nrf2-KO与Actb-GFP鼠联体共生模型，探讨内皮细胞、血小板及白细胞内Nrf2缺失对细胞自身生物活性的影响。本项目同时检测Nrf2与下游抗氧化蛋白，及多种效应细胞与活性物质的动态变化规律，分析其与血栓形成时间的相关性，探寻可用于法医学静脉血栓形成时间推断的生物学指标。

深静脉血栓形成（DVT）因其高发病率与致死率的特点，成为近年来临床医学与法医学研究领域共同关注的一个热点。本项目以氧化应激为切入点，综合使用Nrf2-KO鼠和Nrf2激动剂干预，系统检测内皮细胞激活、血小板聚集与释放、白细胞募集与中性粒细胞NETs形成等生物学进程的变化及相关调节因子的表达变化，探讨Nrf2在DVT发生过程中的调控作用机制。项目通过研究证实，Nrf2在深静脉血栓形成过程中存在双向调控作用机制。在16月龄小鼠中，Nrf2激活可通过上调抗氧化蛋白的表达，降低ROS水平，抑制中性粒细胞NETs形成而抑制DVT的发生。在2月龄小鼠中，Nrf2的缺失导致静脉血栓发生受阻。通过转录组学检测，并进行验证，Nrf2-KO鼠中与血栓发生密切相关的A因子表达水平下降，且A因子启动子上游存在Nrf2结合的ARE序列，课题组随后拟进行进一步研究，深入探讨其调控作用机制。此外，本项目研究表明Nrf2及下游Nqo1、Hmox1、Pparg的mRNA动态变化水平与静脉血栓形成时间具有良好的相关性，有望作为法医学静脉血栓形成时间推断的生物学指标。