抗氧化剂白藜芦醇在预防深静脉血栓形成中的作用及其机制研究

深静脉血栓(DVT)发生率、死亡率高，内皮细胞氧化损伤、血小板氧化激活在其发生、发展中起重要作用，如能对抗氧化损伤，就有可能有效预防DVT。前期在大鼠DVT模型血管、血液中，发现并验证了Rac1、Cathepsin L等调控氧化应激的核心基因、蛋白在DVT形成中起关键促进作用；应用抗氧化剂白藜芦醇对大鼠DVT模型进行干预，发现血液中Rac1等基因明显下调，推测白藜芦醇可能为有效预防DVT的药物。本研究拟构建H2O2诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）/人原代静脉内皮细胞氧化损伤模型，通过检测、分析不同损伤条件下内皮细胞内基因、蛋白及相关信号通路，探讨氧化应激在DVT形成中的调控作用；同时以白藜芦醇为干预因素，检测大鼠血液中氧化应激基因、蛋白变化，结合细胞内实验，探讨其对DVT的预防作用及抗氧化机制，为下一步在临床开发、应用新的预防DVT药物提供分子依据，改善现有预防药物影响凝血功能之不足。

背景：深静脉血栓（Deep venous thrombosis，DVT）发病率高，肺动脉栓塞（Pulmonary embolism，PE）危害大，难以早期预测诊断。内皮细胞氧化应激损伤、凋亡在其发生发展中起重要作用。植物提取物白藜芦醇具有清除自由基、抗氧化、抗病毒、抗炎、抗衰老的作用，推测其可能成为有效预防DVT的药物。主要研究内容：①下腔静脉狭窄法构建SD大鼠、C57小鼠DVT模型；②检测KLF15、MCP-1、TM在DVT小鼠静脉壁组织及APC在血浆中的表达变化；③构建Thrombin、H2O2诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤模型；④研究氧化应激介导静脉内皮细胞损伤、凋亡的关键信号通路（PI3-K/Akt、MAPKs、NF-κB、Nfr2、SIRT1）；⑤探讨白藜芦醇抗氧化、抑制内皮细胞损伤凋亡的作用；⑥siRNA干扰KLF15表达，研究其与下游MCP-1及TM的调控关系；⑦过表达和抑制SIRT1，研究白藜芦醇对HUVECs分泌促血栓相关分子—P-Selectin、PSGL-1、TM、和vWF的调控作用及下游关键信号通路。重要结果：①通过下腔静脉狭窄法成功建立稳定的、成栓率高、死亡率低的SD大鼠和C57小鼠DVT模型，造模后24小时可形成完全性血栓，稳定可靠；②MCP-1在DVT形成初期可能起到促进血栓形成作用。DVT形成初期凝血/抗凝血系统失平衡，TM-APC抗凝系统被激活，可能起到对抗血栓形成作用。③Thrombin诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型中，KLF15可能通过MAKP和 PI3K-AKT信号通路，调控下游MCP-1、TM表达，参与内皮细胞炎症反应、血管重塑及血栓消退影响DVT形成。④PI3-K/Akt、MAPKs、NF-κB、Nfr2信号通路参与氧化应激诱导的内皮细胞损伤凋亡；⑤白藜芦醇通过抑制促凋亡通路（MAPKs）、抑制炎症反应通路（NF-κB）、上调抗凋亡通路（PI3-K/Akt）发挥抑制氧化应激诱导内皮细胞损伤凋亡的作用。⑥白藜芦醇通过SIRT1抑制内皮细胞氧化损伤后促血栓分子P-Selectin、PSGL-1、vWF、和TM蛋白的表达上调。科学意义：白藜芦醇可保护内皮细胞氧化应激损伤，并抑制促血栓分子的表达，可能为预防DVT提供新的药物靶点。