抑癌基因Keap1在肺癌细胞骨架重组与癌细胞侵袭的作用机制研究

高侵袭和易转移是非小细胞肺癌死亡率高的主要原因。已知肿瘤细胞的侵袭和转移与细胞骨架的解聚和重组密切相关。课题组前期研究表明：抑癌基因Keap1在肺癌组织中表达显著降低，与此同时，细胞骨架F-actin出现解聚和重组现象，提示Keap1参与此过程的调控。细胞骨架的再分布和重组与细胞伪足形成和运动密切相关，是肿瘤细胞浸润的重要环节。因此，本课题拟从离体细胞模型和荷瘤裸鼠动物探讨Keap1在肺癌细胞骨架蛋白重组与癌细胞侵袭的作用机制。1 应用过表达或RNAi沉默Keap1基因研究其对细胞骨架蛋白解聚与重组的调控；2 探讨Keap1与小GTP酶蛋白在调节肿瘤细胞骨架重组和迁移的分子机制；3 利用在体光学成像和MRI对肺癌荷瘤裸鼠（过表达Keap1和Keap1沉默）进行无创性的连续观察肿瘤生长转移；结合RhoA抑制剂的应用，阐明肺癌发生发展与侵袭转移的分子机制，为NSCLC临床治疗提供新的思路。

本研究按照计划执行，顺利完成目标。.本研究应用多种非小细胞肺癌细胞系及非小细胞肺癌裸鼠皮下接种模型，通过体外细胞水平实验和在体动物水平实验，观察抑癌基因Keap1对肺癌细胞骨架重组及对细胞运动转移能力的调控，探索可能的分子机制，希望为临床肺癌治疗提供新的思路和理论依据。.本研究首次发现抑癌基因Keap1可明显抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、运动和侵袭能力。活体MRI连续检测同样发现Keap1过表达可抑制肿瘤组织的生长及浸润。主要机制为Keap1可稳定细胞骨架F-actin，抑制F-actin重组，使其稳定的在胞浆内成网状分布；同时Keap1可抑制黏着斑循环，调整黏着斑分布。细胞前缘黏着斑数量明显降低，定向伪足减少，继而抑制肿瘤细胞运动。RhoA信号通路是调控细胞骨架重组的主要信号分子，其活性受GAP的调控。Myo9b是调控RhoA活性特异的GAP蛋白。本研究发现，Keap1过表达可明显提高RhoA的活性，并不影响RhoA的表达。同时Keap1过表达可降低Myo9b的蛋白表达水平。以上结果提示，Keap1可能通过降低Myo9b蛋白水平，继而提高RhoA活性，调控细胞骨架及黏着斑循环，达到抑制肿瘤细胞的运动侵袭能力。这一机制的阐明将为肺癌转移机制的阐明提供新的方向。Keap1在多种肿瘤组织内表达降低，本项目的研究结果可为其他肿瘤的转移机制的阐明提供新的思路。.目前已发表sci论文5篇，核心期刊论文1篇。.依托本项目获得北京市青年英才计划资助。.依托本项目，培养硕士研究生1人，在读硕士研究生1人。培养讲师2人。