MMP-9在脑出血后7-14天的靶向调控及其促神经血管再生的作用及机制研究

脑出血是引起中国居民死亡与残疾的主要原因之一。神经血管再生是脑出血患者神经功能恢复的基础，对于降低脑出血患者的残疾率具有重要意义。脑出血血肿周围与脑梗死梗死周围的病理生理机制相似，基质金属蛋白酶9（MMP-9）在脑梗死后7-14天具有促梗死周围神经血管再生的作用，脑出血后7-14天血肿周围神经血管再生和MMP-9升高均明显，故MMP-9在脑出血后7-14天也应具有促神经血管再生的作用。本项目中，我们拟在脑出血大鼠模型的7-14天，通过受体介导的siRNA转运技术靶向下调脑MMP-9的表达，并测定血肿周围MMP-9、神经血管生长因子和新生神经血管的的变化情况，阐明MMP-9的作用及机制。进而，通过受体介导的表达质粒转运技术靶向上调脑MMP-9的表达，阐明高表达MMP-9能否促脑出血后7-14天的神经血管再生和降低其残疾率。研究将为脑出血后7-14天促神经血管再生治疗提供理论和实验依据。

我们的研究发现在大鼠脑出血后第10天及第14天运用免疫组织化学技术观察到基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和血管源性生长因子（VEGF）和神经源性生长因子（NGF）较正常脑组织明显增加；侧脑室注射运用MMP-9 siRNA干扰后MMP-9、VEGF、NGF的含量在siRNA组较脑出血组明显地减少。同时我们运用Western blotting从蛋白水平检测MMP-9、VEGF和NGF在大鼠脑出血后第10天及第14天的改变，发现和免疫组织化学的结果相似，脑血组较假手术组MMP-9、VEGF、NGF的含量明显的增加。同时运用MMP-9 siRNA干扰后利用Western blotting 也发现MMP-9、VEGF、NGF的含量较出血组明显地减少，但较假手术组明显地增高。我们再次利用免疫荧光技术观察MMP-9及运用siRNA干扰后的实验结果与采用Western blotting 技术观察到的结果一致。.同时我们的研究结果显示：运用免疫荧光技术观察大鼠脑出血后第10天及第14天BrdU（标记S期的新生神经元）和DCX（新生神经元）阳性细胞的数目较假手术组明显增高。利用MMP-9 siRNA干扰后明显地降低了BrdU和DCX阳性细胞的数目，但较假手术组仍明显增高。同时我们采用大鼠神经功能评定量表（NSS量表）从整体水平评价大鼠神经功能在脑出血后第10天及第14天的变化，结果显示运用MMP-9 siRNA干扰后大鼠神经功能的恢复较出血组更差。