肺癌组织细胞抑癌基因Keap1表达下降的调控机制研究

Keap1作为新的候选抑癌基因受到研究者的广泛关注。本课题组前期研究表明Keap1在肺癌组织和肺癌细胞系表达明显降低，这种变化与Keap 1基因启动子区高甲基化密切相关，但高甲基化导致Keap1表达下降的机制尚不清楚。根据软件分析预测，Keap1基因启动子区可能存在调节该基因表达的重要转录因子（Sp1和AP2）结合位点，推测甲基化阻碍了与其结合，引起Keap1表达下降。因此，本项目拟证明Keap 1基因启动子内是否存在Sp1和AP2结合位点？通过启动子删除和突变分析等方法研究Sp1和AP2结合位点对启动子活性的影响。并应用去甲基化药物、EMSA和ChIP方法检测肺癌细胞系Keap1基因启动子甲基化状态对Sp1和AP2结合的影响；利用siRNA技术探讨阻碍Sp1和AP2与Keap1基因结合后，肺癌细胞内Keap 1基因表达改变，为揭示抑癌基因Keap1在肺癌组织低表达的分子机制提供实验依据。

本课题主要研究抑癌基因Keap1在肺癌细胞中低表达的分子机制。本课题组前期研究表明Keap1 在肺癌组织和肺癌细胞系表达明显降低，这种变化与Keap 1 基因启动子区高甲基化密切相关，但高甲基化导致Keap1 表达下降的机制尚不清楚。本项目证实Keap 1 基因启动子内是否存在转录因子Sp1结合位点。通过启动子删除和突变分析等方法研究Sp1可以增加启动子活性。应用去甲基化药物、EMSA 和ChIP 方法证实肺癌细胞系内Keap1 基因启动子甲基化可以阻碍Sp1结合；也利用siRNA 技术探讨了抑制Sp1表达对Keap1 基因的影响，本研究为揭示抑癌基因Keap1 在肺癌组织低表达的分子机制提供了实验依据。