Anti-β2GPI/β2GPI诱导单核细胞表达TF是否经过TLR4/MyD88信号转导通路？

大量研究表明anti-β2GPI/β2GPI复合物在抗磷脂综合征（APS）血栓形成中发挥重要作用，然而，迄今为止其作用机制仍未阐明，因而缺乏有效干预措施。本研究组多年来坚持这一领域的探索，证明了anti-β2GPI/β2GPI 通过非Fc受体途径诱导血液单核细胞表达TF活性，引发高凝；细胞表面Annexin A2作为β2GPI受体在其中发挥关键作用。近期结果提示TLR4/MyD88途径参与该过程。本项目将以单核细胞株THP-1为细胞模型，利用细胞及分子生物学研究技术，深入阐明anti-β2GPI/β2GPI复合物与Annexin A2及TLR4之间的作用关系；并利用相关特异抑制物、基因转染及RNAi技术，多方面验证TLR4/MyD88信号通路在anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导单核细胞TF表达过程中的作用及其机制。研究内容将是APS血栓机制探讨的新进程，将为治疗提供新靶点依据。

本课题前项研究表明，自身抗磷脂抗体（anti-β2GPI）与其抗原复合物（anti-β2GPI/β2GPI）通过非Fc受体途径刺激血液单核细胞表达TF活性，是引发抗磷脂综合征（APS）高凝的重要机制之一；细胞表面Annexin A2（ANX2）作为β2GPI受体在其中发挥关键作用。然而，ANX2并非贯穿细胞膜内外蛋白，不具备细胞内信号转导功能。本项目在原有研究基础上，重点探讨了细胞表面TLR4是否作为“adaptor” 连接ANX2与胞内的信号转导，以及TLR4/MyD88引发的信号通路在其中的作用。本研究采用亲和层析、免疫共沉淀、免疫印迹等方法证明了细胞表面存在β2GPI-ANX2-TLR4的复合物，表明TLR4与ANX2作为抗β2GPI/β2GPI的共受体共同介导了胞外刺激信号。抗β2GPI/β2GPI复合物作用于单核细胞后, TLR4及其接头分子MyD88、TRIF被诱导表达增加；其信号转导途径中的中间信号分子IRAKs、TRAFs、MAPKs均可被激活；最后，二种核转录因子-NFκB及AP-1在此过程中也被激活。分别阻断这些分子的激活，均能抑制anti-β2GPI/β2GPI复合物对细胞表达活性因子（TF、TNFα等）的刺激效应，本研究结论：TLR4与ANX2作为共受体，介导抗β2GPI/β2GPI复合物刺激细胞，并引发细胞内一系列信号分子的激活，最终促进细胞表达TF等活性分子，导致APS高凝状态的形成。研究结果提示,阻断TLR4 及其介导的信号转导通路有利于预防及治疗APS的血栓形成。