Th17细胞对日本血吸虫虫卵肉芽肿及肝纤维化的作用

通过产生大量虫卵而导致肝脏肉芽肿和纤维化，是日本血吸虫的重要致病原因。控制虫卵肉芽肿及肝纤维化对血吸虫病的防治起关键作用。目前对日本血吸虫虫卵所引起的宿主免疫应答的认识主要集中于Th1细胞介导的细胞免疫应答和Th2细胞介导的体液免疫应答。Th17细胞是近年新发现的一种T淋巴细胞亚群，它所分泌的细胞因子IL-17具有强大的致炎性，与多种自身免疫性疾病的发生和发展相关,而在日本血吸虫致病中的作用尚不清楚。本项目拟采用ELISA／流式细胞技术等方法，观察日本血吸虫感染小鼠后肝脏肉芽肿和纤维化发生情况，以及脾和淋巴结的Th17细胞含量和IL-17水平。并分别用IL-17阻断抗体和Th17细胞正/负调节因子IL-12和IL-23作用于日本血吸虫感染小鼠，观察Th17细胞含量和IL-17水平及对肝纤维化的影响。本研究对丰富日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成机制有重要意义，并为日本血吸虫病的防治提供新的思路。

Th17细胞是近年来发现的一种新的T细胞亚群，主要分泌IL-17，能大量招募中性粒细胞，引起局部的炎症及免疫损伤。围绕着Th17在日本血吸虫所致疾病中的作用这一主题，我们建立血吸虫感染C56BL/6小鼠模型，在感染后4、6、8周，观察肝脏的组织病变情况。同时分别使用SEA、CD3和+CD28和PMA+Ionomycin刺激分离的肝脏淋巴细胞，使用ELISA、RT-PCR和细胞内细胞因子染色（ICCS）等方法观察Th17细胞的含量变化与疾病的关系。结果表明血吸虫感染能够明显的诱导Th17细胞的产生。同时，我们使用激光共聚焦技术对Th17细胞进行组织定位，但结果不甚理想。为明确Th17在血吸虫病中的作用，我们使用IL-17阻断抗体进行腹腔注射，结果表明抗IL-17能够有效的抑制肝脏肉芽肿及纤维化的形成。此外，我们还对血吸虫感染小鼠的肠系膜淋巴结细胞的Th细胞含量进行动态观察，结果表明血吸虫感染能够在肠系膜淋巴结中诱导Th17细胞产生，且血吸虫感染诱导的Th17细胞能分泌Th2细胞因子。在研究过程中，我们发现感染诱导的IL-17主要由γδT细胞产生，且正常小鼠肝脏存在大量的NKT细胞。因此，我们进一步研究血吸虫感染诱导的肝脏中γδT细胞和NKT细胞的作用。结果表明血吸虫感染导致这两群天然免疫细胞的含量、表型和功能均发生明显改变，既天然免疫细胞在血吸虫所致肝病中也发挥了重要的作用。为此，我们比较了肝脏、肺、脾和肠系膜淋巴结中γδT细胞和NKT细胞的含量、表型和功能的特点，发现这两群天然免疫细胞存在明显的组织差异性。在对血吸虫感染诱导的T细胞亚群进行分析的同时，我们发现肝脏中存在大量的IFN-γ+IL-4+ Th0细胞，在感染6周左右其比例可以达到CD4+细胞的10%。这群Th0细胞能大量的表达IL-10及少量的IL-17。