促性腺激素诱导下人非黄体化颗粒细胞的旁分泌调节作用研究

排卵前的LH峰可以快速诱发卵巢中排卵、黄体化等重要事件的发生。由于LH的受体主要表达于卵巢的颗粒细胞和膜细胞，所以LH所触发的排卵现象需要通过颗粒细胞的旁分泌作用介导完成。在哺乳动物中，已经发现了多种介导LH作用、参与卵巢旁分泌调节的因子。然而由于实验标本的限制，目前对于女性卵巢颗粒细胞的旁分泌调节作用还知之甚少。原因在于人卵巢颗粒细胞通常分离于经过促排卵治疗的IVF患者卵泡液中，此时细胞已启动黄素化进程，不适合于研究正常生理状态下LH所诱发的排卵反应。近期，我们通过采集未经过任何促排卵治疗的IVM患者的卵泡液，成功分离培养了非黄体化的颗粒细胞。以此为平台，跟据动物研究的结果，我们选取了几种重要的促卵母细胞成熟的旁分泌调节因子（BDNF,GDNF,EGF-like growth factors）做为候选基因，希望通过分析这些因子受促性腺激素调节的机制，初步揭示人卵巢颗粒细胞的旁分泌调节机理

在哺乳动物中，已经发现了多种介导LH作用、参与卵巢旁分泌调节的因子。然而由于实验标本的限制，目前对于女性卵巢颗粒细胞的旁分泌调节作用还知之甚少。已有的报道表明，BDNF和GDNF这两种因子在鼠类卵巢中可以作为旁分泌调节因子促进卵母细胞体外成熟。本课题主要研究了BDNF和GDNF在人卵巢颗粒细胞中的表达及其对人卵母细胞成熟的调节作用。研究以接受非刺激IVM治疗方案的患者卵泡液中分离的颗粒细胞为材料。未成熟卵母细胞源于接受卵母细胞单精子显微注射的常规IVF患者。免疫组化的结果显示BDNF和GDNF均表达于体外分离的人卵巢非黄素化颗粒细胞中。荧光定量PCR的结果表明促性腺激素（FSH和/或hCG）可以显著增加BDNF和GDNF转录水平的表达。未成熟卵的体外培养揭示了BDNF和GDNF可以作为人卵母细胞的促成熟因子促进第一极体的排出。这些结果表明FSH和hCG可以快速增加BDNF和GDNF的表达，这两个颗粒细胞来源的因子作为潜在的旁分泌调节因子促进了卵母细胞的成熟。在IVM治疗方案中，如果在培养体系中加入BDNF和GDNF可以促进卵母细胞的核成熟。