急性B淋巴细胞白血病中转录因子E2F3a在miR-210抑制CASP8AP2基因表达中的作用

尽早识别出预后差的患儿是提高B-ALL疗效的关键。初诊时CASP8AP2低表达，则MRD水平高，易复发。CASP8AP2启动子存在转录因子E2F3a的结合位点，二者mRNA表达水平呈明显正相关，且均为miR-210的靶基因。我们推测，miR-210通过抑制E2F3a表达，减弱其对CASP8AP2的转录激活，提高对CASP8AP2的表达抑制程度。拟采用CASP8AP2启动子荧光报告质粒、DNA定点突变、染色质免疫共沉淀，证明E2F3a可激活CASP8AP2转录；利用CASP8AP2启动子荧光报告质粒、E2F3a和miR-210表达质粒，证明miR-210通过抑制E2F3a进一步降低CASP8AP2表达。创新点在于证明E2F3a可激活CASP8AP2转录，并在miR-210抑制CASP8AP2表达中发挥重要作用。本项目有助于阐明儿童B-ALL中CASP8AP2表达降低的机制，提供新的治疗靶点。

近年儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）的5年无事件生存率已超过80%，但复发率仍有约15%，因此需要寻找新的分子标志并探讨其功能。CASP8AP2参与细胞凋亡、细胞周期进展、糖皮质激素受体和c-Myb介导的基因转录等。CASP8AP2低表达与儿童ALL复发密切相关，但低表达机制尚不清楚。.本研究通过分析E2F3a与野生型和突变型CASP8AP2启动子的相互作用，证明E2F3a可激活CASP8AP2转录；通过分析miR-210对CASP8AP2和E2F3表达的抑制作用，证明miR-210通过抑制E2F3a进一步降低CASP8AP2表达。.本研究取得的重要结果有：①miR-210或E2F3a低表达的患儿预后差，敲低或升高白血病细胞的miR-210或E2F3a表达水平可以明显降低或提高对化疗药物的敏感性。②E2F3a可以直接结合CASP8AP2启动子的3个位点，激活后者的转录，E2F3a对白血病细胞的药物敏感性的影响是通过上调CASP8AP2实现的。③联合检测CASP8AP2和ARS2的表达水平，能够更准确地预测复发。④CASP8AP2通过与ARS2相互作用促进miR-210的生成。⑤在ALL细胞中，miR-210不影响E2F3a和CASP8AP2的表达。.本研究获得的关键数据有：①提高或降低miR-210水平，可降低或提高Reh细胞对DNR、DEX、L-ASP，RS4;11细胞对DNR、DEX、VCR的IC50。②过表达E2F3a后，Reh、697细胞增殖加快，S期及G2/M期细胞明显增多，对VCR、DNR的IC50明显降低。同时敲低CASP8AP2导致697细胞对VCR的敏感性减弱，DNR敏感性也有减弱的趋势。③CASP8AP2、ARS2结合第78天MRD、泼尼松反应预测复发的ROC曲线下面积达0.914。④CASP8AP2与ARS2相互作用，通过影响pri-miR-210的加工而调控miR-210的生成。⑤提高或降低miR-210水平后，CASP8AP2、E2F3a的表达水平没有明显变化。.本研究阐明E2F3a对CASP8AP2的转录激活作用，在儿童ALL中E2F3a表达降低，下调CASP8AP2表达，造成白血病细胞对化疗药物耐受。miR-210高表达可提高药物敏感性，但不影响前两者表达。本研究为儿童ALL提供新的预后分子标志及治疗靶标，为研究复发机制提供重要线索。