食管癌高特异性免疫细胞治疗疫苗的创制及其实验研究

为了获得一种在多重调控下、安全、高效的食管癌基因治疗体系，本研究拟首先以食管癌高表达的Survivin为靶基因设计小干扰RNA（Sur-siRNA），构建腺病毒表达载体，通过封闭靶基因表达，降低癌细胞的增殖活性；在此基础之上，选用已经文献证实在食管癌中呈显著低表达的MicroRNA（mir_203、mir_205）为调控因子，利用肿瘤与正常组织中差异表达MiR的作用特性，设计在Sur-siRNA腺病毒载体中插入食管癌特异低表达MiR作用位点，提高其针对靶基因的特异性和高活性；重组病毒AdSur-MiR-siRNA，体外感染树突状细胞（DC）制备免疫细胞疫苗，通过DC将治疗基因带到体内，保护腺病毒不受体内中和抗体的免疫清除，且能激活DC诱导特异性宿主免疫反应。本研究既保证了治疗计划的安全性和有效性，又克服了传统基因治疗转染率低、表达量少及特异性弱等缺点，从根本上遏制癌细胞对常规治疗的逃逸。

为了获得一种在多重调控下、安全、高效的食管癌基因治疗体系，本研究以食管癌高表达的Survivin为靶基因设计设计小干扰RNA（Sur-siRNA），构建腺病毒表达载体，通过封闭靶基因表达，降低癌细胞的增殖活性；在此基础之上，选用已经文献证实在食管癌中呈显著低表达的MicroRNA（Let-7）为调控因子，利用肿瘤与正常组织中差异表达MiR的作用特性，设计在Sur-siRNA腺病毒载体中插入食管癌MiR作用位点，从而提高其针对靶基因的特异性和高活性，这种基因治疗策略，赋予了基因表达载体更好的安全性和有效性。重组病毒AdSur-MiR-siRNA，通过免疫活性细胞将治疗基因带到体内，既保护了腺病毒不受体内中和抗体的免疫清除，又能诱导特异性宿主免疫反应。本研究既保证了治疗计划的安全性和有效性，又克服了传统基因治疗转染率低、表达量少及特异性弱等缺点，从根本上遏制癌细胞对常规治疗的逃逸，为食管癌的生物治疗提供一种更加安全有效的模式。.研究计划进展顺利，超额完成原定研究任务，达到预期研究目标：（1）成功构建对肿瘤特别是食管癌有明确疗效的靶向封闭Survivin表达的腺病毒载体，具有特异杀伤食管癌细胞的能力；（2）体内外证实该腺病毒载体基因治疗系统有明确的抗肿瘤意义，能够在食管癌细胞内特异地表达Survivin-shRNA，封闭Survivin表达，从而诱导癌细胞凋亡，阻滞细胞周期，抑制癌细胞生长；（3）研究证实Survivin是食管癌增殖、预后的主要影响因子，P16能够通过抑制AKT信号通路下调Survivn表达，而OCT4能够激活CCND1启动子上调Survivin表达。在此基础上，我们设计建立了2种基因治疗方案，即转染外源基因P16或者封闭内源性Survivin及OCT4表达，在裸鼠移植瘤试验中均收到良好治疗效果；发表论文4篇，其中SCI论文3篇，总影响因子达18.295，单篇最高影响因子超过10分；培养硕士研究生1名。.