FGF基因家族microRNA结合位点多态性与非综合征型唇腭裂易感性及其机制研究

非综合征型唇腭裂（non-syndromic orofacial clefts，NSOC）是人类最常见的先天发育畸形之一，由遗传和环境因素共同作用形成。目前，基因3'端非翻译区域内（3' untranslated region，3'UTR）单核苷酸多态性（SNPs）影响microRNA对靶基因表达调控的研究正受到广泛关注，并证实其与人类诸多复杂疾病发生发展密切相关。本课题组前期已应用生物信息学方法筛选出FGF基因家族3'UTR区域内可能影响microRNA结合的SNPs，拟进一步在大样本的NSOC病例-对照人群中探讨其与NSOC易感性的关系。在此基础上，采用一系列细胞分子生物学实验方法，研究其生物学意义。最终从宏观以及微观两个方面阐明其参与NSOC发生发展的可能生物学机制，为寻找与NSOC发病相关的生物学标志物，开展早期筛检，实施切实有效的预防措施，控制发病提供科学依据。

背景: 非综合征型唇腭裂（NSOC）是一种复杂的多基因遗传疾病。成纤维细胞生长因子（FGFs）及其受体在颅颌面生长发育中发挥着重要的作用。其变异与人类多种颅颌面先天发育畸形密切相关。微小RNA（miRNA）结合位点及其附近单核苷酸多态性（SNPs）能够影响miRNA-mRNA结合能力，进而与诸多疾病的发生发展相关。位于FGF基因家族上miRNA结合位点及其附近SNPs可能与NSOC发生相关。.方法：采用病例-对照设计，在602个NSOC病例和605个匹配对照样本中对24位于FGFs和FGFRs上miRNA结合位点或其附近的SNPs进行了研究。收集49个病例的唇组织样本研究其中的miRNA表达情况。miRNA-mRNA的互作通过qPCR, western-blot和双荧光素酶报告基因实验进行证实。.结果：FGF2/rs1048201 (ORadd=0.83, 95%CI=0.71-0.98, P=0.026); FGF5/rs3733336 (ORadd=0.72, 95%CI=0.59-0.87, P<0.001)和FGF9/rs546782 (ORadd=0.57, 95%CI=0.33-0.98, P=0.043) 与NSOC易感性相关。分层研究中，rs1048201与单纯唇裂 (P=0.028) 和唇裂合并腭裂(P=0.046) 易感性相关。而rs3733336与单纯唇裂和单纯腭裂易感性相关。联合作用分析发现，当存在一个保护性等位基因(rs1048201-T, rs3733336-G 或 rs546782-T)时，患唇腭裂的相对危险度降低至0.67；而存在两个保护性等位基因时降低至0.53；在存在三个及以上的保护性等位基因时，进一步降低到0.48。同时，在人群中，随着保护性等位基因个数的增加，罹患唇腭裂的风险随之下降(P for the trend<0.001)。在49例唇组织样本中，我们检测到了hsa-miRNA-496, hsa-miRNA-145, hsa-miRNA-187的存在。而通过qPCR，western-blot和双荧光素酶报告基因实验也证明了它们与FGF2、FGF5、FGF9 的结合能够被SNP调节。.结论：本研究发现FGFs miRNA结合位点上或附近的SNP能够影响miRNA-FGFs相互作用而与非综合征型唇腭裂易感性相关。