miR-34a调控ATG9A介导的自噬在盆腔器官脱垂中机制研究

The occurrence of pelvic organ prolapse mainly related to the change of collagen,which fibroblasts can compound and secret. Studies showed the close relationship between autophagy and collagen metabolism,wether can regulate cell autophagy activity to increase the amount of collagen or not, delay the occurrence of POP. Preliminary study show that miR-34a cam inhibit ATG9A and than regulate autophagy,which show different expression in POP and no-POP patients, but the role and mechanism of miR-34a and autophagy is not clear.Our study intends to collect the tissue from the vaginal wall and uterosacral ligament of patients with or without POP. The fibroblasts would be cultivated.In order to prove expressional difference and correlation of miR-34a,ATG9A and collagen in tissues and fibroblasts.To intervent expression of miR-34a in fibroblasts in vitro and than observe its expression of ATG9A and autophagy activity; Whether autophagy activation can inhibit the occurrence of POP or not in animal models in mice, finally clarify the function and mechanism of miR - 34a and autophagy activity in POP. This study looks for new treatments for patients with POP and provides basic experiment research.

盆腔器官脱垂（pelvic organ prolapse,POP）的发生主要与由成纤维细胞合成并分泌的胶原减少有关。研究发现自噬与胶原代谢相关，能否通过调控细胞的自噬活性增加胶原的量，延缓POP的发生。前期研究中miR-34a抑制ATG9A 的表达调控自噬，在POP与非POP组织中表达存在差异，但POP中miR-34a与自噬的作用及机制仍不明确。本研究收集POP与非POP患者阴道前壁和骶主韧带；培养组织中成纤维细胞，检测细胞中miR-34a、 ATG9A 和胶原的变化，通过拮抗或促进细胞的自噬作用检测胶原的量，揭示miR-34a、ATG9A 和自噬与POP的相关性；体外干预成纤维细胞miR-34a的表达观察其对ATG9A表达和自噬活性变化的影响；在小鼠动物模型中验证自噬激活可否抑制POP的发生，最终阐明miR-34a与自噬活性在POP的作用和机制。为POP患者寻找新的治疗方法提供基础研究。

盆腔器官脱垂（Pelvic Organ Prolapse，POP）是由于盆底支持组织薄弱导致盆腔脏器移位而出现功能异常的妇科疾病，严重影响患者生活质量。研究表明盆底支持组织胶原代谢紊乱与POP发生发展相关。课题组前期研究发现，POP患者较非POP患者的阴道壁和宫骶韧带组织胶原合成减少和自噬水平下降，并与POP严重程度呈相关性。自噬作为机体的保护机制与胶原代谢相关，而自噬与胶原代谢的相关性在POP发生机制中尚不明确。因此提出miR-34a调控ATG9A介导的自噬影响POP的发生发展的假设。收集POP和非POP患者的阴道壁组织，原代培养两组人阴道壁成纤维细胞，检测其自噬及胶原代谢相关分子发现，POP组成纤维细胞存在自噬、胶原合成水平降低。通过饥饿诱导和自噬抑制剂三甲基腺嘌呤（3-MA）干预成纤维细胞，结果表明饥饿诱导可促进成纤维细胞自噬活性，3-MA可抑制成纤维细胞自噬活性，但是饥饿诱导和3-MA介导的自噬活性改变没有引起成纤维细胞胶原代谢改变。另有研究表明，细胞自噬可缓解氧化应激诱导的细胞衰老和胶原降解，氧化应激损伤作为POP发生的潜在机制，与自噬的相关性在POP发生机制中尚不明确。课题组使用过氧化氢建立人阴道壁成纤维细胞的氧化应激损伤模型，过氧化氢可诱导其活性氧增加，最终导致细胞衰老和胶原降解。自噬诱导剂雷帕霉素干预人阴道壁成纤维细胞氧化应激损伤模型后可缓解氧化应激损伤导致的细胞衰老和胶原降解，而自噬抑制剂3-MA可逆转雷帕霉素对成纤维细胞的保护作用，表明雷帕霉素通过自噬对成纤维细胞产生保护作用。利用慢病毒转染技术过表达或沉默人阴道壁成纤维细胞miR-34a，发现过表达miR-34a可下调ATG9A基因表达和抑制自噬活性，而过表达ATG9A没有引起miR-34a基因水平升高。利用双荧光素酶实验验证了ATG9A是miR-34a的靶基因。过氧化氢分别干预miR-34a基因沉默组和ATG9A过表达组的阴道壁成纤维细胞，胶原表达和自噬活性均较空白对照组高。综上所述：miR-34a调控ATG9A介导的自噬可拮抗氧化应激损伤导致的胶原降解，自噬诱导剂的应用为POP的临床治疗提供新的可能。