“快速一体化”方法筛选雪菊抗痛风活性成分

Gout is the rank 2 metabolic disease in the world. The therapeutic agents usually have obvious adverse effects. Xanthin oxidase (XO) is a main target for development of antigout agents. Therefore, it is very important to discover natural, safe and effective XO inhibitors with antioxidant activity in Chinese medicines for treatment of gout through reduced fromation of uric acid and free radicals. In previous study, the research group of applicant tested the XO inhibitiona activities of 1003 extracts of commonly used Chinese medicines, including 506 water extracts and 479 ethanol extracts, and found that both water and ethanol extracts of snow chrysanthemum had potent inhibition activity on XO. This study is aim to develop a fast method for screening XO inhibitants and antioxidants in snow chrysanthemum based on the applicant’s patent (ZL201520565239.3) and previous works, i.e. global components separation based on multiple-column chromatography coupled with MS detection and online multiple targets (XO, free radical) inhibition activity assay, which intergrate separation, identification, collection and bioassay into one run. Based on this method, the disadvantages of conventional method for discovery of active components in complex mixture, such as tedious, time consuming and poor efficiency, can be avoided, and the potential potent and safe antigout agent in snow chrysanthemum will be developed.

痛风(Gout)已成为世界第二大代谢类疾病，而目前治疗药物都存在明显的毒副作用。由于黄嘌呤氧化酶（XO）是抗痛风药物的重要靶点，因此，从中药中寻找天然、安全、高效的黄嘌呤氧化酶（XO）抑制剂，减少体内尿酸的生成，及清除尿酸生成过程中产生的自由基，对痛风治疗具有重要意义。申请人课题组前期采用体外XO活性抑制实验，对1003个常用中药提取物（506个水提物和479个醇提物）XO抑制活性检测发现：雪菊提取物具有极强的XO抑制活性。本研究拟在申请人课题组专利技术（ZL201520565239.3）和前期研究基础上，利用多柱色谱全成分分离结合多靶标在线活性筛选，构建基于色谱分离、质谱鉴定、在线收集和活性检测的“快速一体化”方法，克服从复杂体系中寻找活性化合物的传统筛选方法之繁琐、耗时、效率低的缺陷，筛选雪菊中XO抑制剂和自由基清除剂，研究潜在的高效低毒抗痛风药物。

痛风(Gout)已成为世界第二大代谢类疾病，而目前治疗药物都存在明显的毒副作用。由于黄嘌呤氧化酶（XO）是抗痛风药物的重要靶点，因此，从中药中寻找天然、安全、高效的黄嘌呤氧化酶（XO）抑制剂，减少体内尿酸的生成，及清除尿酸生成过程中产生的自由基，对痛风治疗具有重要意义。本研究利用课题组色谱分离在线活性检测专利技术（“快速一体化”方法），即色谱分离-活性检测-质谱鉴定-成分收集（如有必要）一体化方法，从具有XO抑制活性的雪菊(Coreopsis tinctoria)提取物中筛选出2个强XO抑制剂，马里苷（marein）和二咖啡酰奎宁酸（dicaffeoylquinic acid），IC50分别为13.6 ug/mL (13.0~14.3 ug/mL，95%置信区间)和8.1 ug/mL (3.2~11.1 ug/mL，95%置信区间), LO2正常人肝细胞MTT结果显示，两种XO抑制剂在6~400 ug/mL无明显肝细胞毒性。.HTPLC-DPPH自显影法分析了菊科植物中雪菊和菊花抗氧化活性差异，结果表明雪菊的抗氧化活性要优于菊花 (花部位)。雪菊中主要的抗氧化成分共7种，包括okanin, isookanin, marein, flavanomarein, 5,7,3′,5′-tetrahydroxyflavanone-7-O-glucoside, 3,5-dicaffeoylquinic acid和chlorogenic acid，其抗氧化活性均高于VC。.建立了雪菊中黄酮和多酚类化合物分析的CZE方法。该方法快速、灵敏、准确。应用该方法成功定性、定量分析了不同部位和产地雪菊中的黄酮类化合物，论文作为封面故事发表于Electrophoresis。本研究还建立了HPLC-DAD/CAD和GC-MS分析不同部位和产地雪菊的化学成分，特别是首次分析了雪菊的寡糖，为雪菊的开发利用奠定了基础。