青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌毒力相关基因及免疫学研究

通过对青藏高原牦牛出血性败血症进行流行病学调查，血清学分析，筛选出有交叉保护功能的菌株，用蛋白组学和蛋白印迹技术比较交叉保护菌株和非交叉保护菌株的蛋白组结构并根据蛋白组结构和蛋白免疫原性的差异初步筛选出与交叉保护相关的抗原；对这些抗原蛋白进行克隆、表达及纯化；用攻毒试验评估天然蛋白及其重组蛋白的免疫保护力；根据试验结果确定下一步研发地方血清型牦牛多杀性巴氏杆菌亚单位疫苗的研究计划。. 本项目首次对青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌毒力相关基因进行研究。借助分子生物学研究手段，拟确定引起青藏高原牦牛出血性败血症的相关毒力因子，进而对其交叉保护抗原蛋白进行克隆、表达，以期了解青藏高原地区牦牛多杀性巴氏杆菌的主要毒力基因与其致病性的相关性以及这些毒力基因中的交叉保护抗原应用于疫苗的可行性，为研制更为有效的预防青藏高原牦牛出血性败血症的亚单位疫苗提供理论依据。

本项目针对牦牛出血性败血症等高原动物多杀性巴氏杆菌病进行了流行病学调查，结果呈现发病率高低不一、致死率高等7个新的流行特点，为青藏高原动物多杀性巴氏杆菌病积累了流行病学资料；通过常规细菌学分离方法，共获得8株（5株牦牛源、1株猪源、1株藏羊源、1株禽源）Pm分离菌株。通过药敏试验，筛选出敏感抗生素用于牦牛多杀性巴氏杆菌病临床治疗，效果显著，具有较强的实践指导意义；针对多杀性巴氏杆菌的种特异性KMT-1基因建立了一种相对荧光定量PCR法用于牦牛多杀性巴氏杆菌病的临床检测，结果显示其敏感性高、特异性强，为该病的早期诊断及分子流行病学调查提供了一种新的快速检测方法；同时应用多重PCR方法对牦牛多杀性巴氏杆菌分离菌株进行了分型，结果均为B型，为牦牛多杀性巴氏杆菌提供了一种新的分型方法；在此基础上，对青海地区不同动物源的多杀性巴氏杆菌分离菌株的外膜蛋白H基因进行了克隆、表达及免疫原性研究，揭示了高原动物多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因的分子进化关系，为今后研制地方血清型基因工程亚单位疫苗奠定了分子基础。