基于唾液酸氧化特性的比较糖蛋白组学新方法研究

临床研究表明许多疾病的发生与发展过程与糖蛋白是否糖基化和糖基化位点上糖链结构变化紧密相关，如何准确地测定蛋白质糖基化位点及其糖链结构对糖蛋白研究有着极为重要意义。但是由于糖蛋白上相连糖链结构的复杂性和多样性，给糖蛋白分析造成很大的困难，因此发展对不同结构糖肽选择性分离及富集的高效方法成为糖蛋白组学的重要研究方向之一。本课题拟建立一种快速、简便的利用唾液酸与其它单糖氧化反应的差异性，选择性氧化唾液酸或非唾液酸化糖肽，并采用水溶性高分子材料为分离介质，选择富集带有不同糖链结构糖肽的比较糖蛋白组学方法。在研究中，分离富集后的糖肽经过肽-N-糖苷酶处理后，采用液相色谱-质谱联用的方法对标准糖蛋白的糖基化位点及唾液酸化程度进行测定。并将该方法应用于正常人血清和肝癌病人血清中的比较糖蛋白组学研究，挖掘特定糖蛋白在疾病状态下变化的规律，寻找可能的疾病标志物。

摘要：..临床研究表明许多疾病的发生与发展过程与糖蛋白的是否糖基化和糖基化位点上糖链结构变化紧密相关，如何准确的测定蛋白质糖基化位点及其糖链结构的对糖蛋白研究有着极为重要的意义。但是由于糖蛋白上相连糖基复杂性和多样性，极大制约了分析的可能性和灵敏度，因此发展对不同结构糖基化多肽选择性分离及富集的高效方法成为糖蛋白组学的重要研究方向之一。我们通过利用不同浓度的高碘酸钠与反应温度，选择性氧化含有唾液酸或非唾液酸糖肽，生成带有醛基的多肽，然后采用含有氨基的水溶性高分析材料与之发生还原氨化反应进行富集，分离富集后的糖肽经过肽-N-糖苷酶处理后，采用液相色谱-质谱联用的方法对糖蛋白的糖基化位点及唾液酸化程度进行测定。在研究中，我们也建立一种简单和高效的唾液酸的衍生方法用于含唾液酸的糖链分析，所建立的方法可以完全衍生不同糖苷键结合的唾液酸，并且不破坏唾液酸的O-乙酰化修饰。对人、小鼠及大鼠血清中的N-糖链分析结果表明，所建立的方法可以用于血清中N-糖链结构变化研究。