猪瘟病毒糖蛋白E2高变区对疫苗C株获得性免疫应答影响的研究

猪瘟由猪瘟病毒感染引起，获得性免疫在控制猪瘟中起着关键作用。囊膜糖蛋白E2是该病毒的主要宿主保护性抗原，也是新型疫苗研发的靶基因。随着猪瘟病毒在全球范围内流行趋势由基因1型向2型过渡，2型流行毒株E2高变区内抗原表位的变异对疫苗C株获得性免疫的影响亟待深入研究。本项目拟在前期对不同型猪瘟病毒E2分子变异和抗原结构差异研究的基础上，以疫苗C株免疫猪的血清和外周血单核细胞为材料，应用真核表达系统表达不同重组E2蛋白，从与疫苗抗体的交叉反应性、分泌特异性抗体的细胞数、IFN-γ转录和表达等体液免疫和细胞免疫水平：（1）探明2型流行毒株糖蛋白E2高变区及其关键差异氨基酸对疫苗C株获得性免疫应答的影响；（2）进一步应用反向遗传学技术拯救携带关键差异氨基酸的重组C株病毒，阐明其生物学特性及免疫原性。研究结果为改造传统C株疫苗，开发基于流行毒株E2的新型疫苗奠定重要基础。

本研究基本按照原定计划进行，并根据研究结果和文献参考进行了适当调整。我们综合使用了分子生物学、病毒学、生物化学、细胞生物学和生物信息学等方法，主要系统研究了猪瘟病毒：（1）利用杆状病毒表达系统表达纯化囊膜糖蛋白E2；（2）流行毒株E2高变区对C株疫苗免疫猪血清抗体反应性的影响；（3）流行毒株E2高变区对C株疫苗免疫猪PBMC分泌抗体和IFN-γ的影响；（4）影响C株疫苗获得性获得性免疫的关键高变区中主要差异氨基酸对C株疫苗免疫猪血清抗体反应性的影响；（5）影响识别I型毒株特异性单抗2B6/2B10反应性的差异氨基酸位点鉴定。