猪瘟病毒E2糖蛋白调控MHC classⅡ机理的研究

本项目针对猪瘟病毒可在免疫猪扁桃体、睾丸及血液白细胞中长期带毒，呈现免疫逃逸现象，使该病反复流行而难以根绝的问题，在原来对猪瘟病毒持续性感染的研究基础上，发现猪瘟病毒感染猪的外周血单核细胞及PK-15细胞MHC Ⅱ基因的转录、翻译水平出现下调，证明这种变化与猪瘟病毒E2蛋白有关， E2蛋白可能通过干扰抗原递呈参与了免疫逃避机制。对病毒免疫逃逸现象的研究表明， IFN-γ-MAPK通路可能卷入了免疫逃逸机制，因此本项目通过研制该信号转导通路相关分子的抗体，用免疫印迹和免疫荧光等技术深入研究猪瘟病毒E2蛋白与IFN-γ-MAPK-MHC Ⅱ类通路的分子互作关系，解决E2蛋白对MHC Ⅱ类分子表达及其调控通路影响的科学问题，阐明猪瘟病毒的细胞免疫逃逸机理，达到比上一个项目更高的水平，为猪瘟防控提供新的理论依据。

本研究通过荧光定量PCR和Western blot方法证实了猪瘟病毒感染易感细胞PK-15 （猪肾细胞）导致MHC-Ⅱ类分子的上调表达情况。为了研究猪瘟病毒与MHC-Ⅱ分子间的相互作用机制，构建了猪瘟病毒各个结构蛋白及非结构蛋白的原核、真核表达系统，通过原核表达系统的表达、纯化、免疫小鼠制备了相应蛋白抗体。在此基础上，进一步探索MHC-Ⅱ类分子（SLA-DR）在猪瘟病毒感染PK-15细胞后的抗原递呈途径和MAPK途径的变化情况，通过制备MHC-Ⅱ类分子（SLA-DR）的上游刺激因子CⅡTA（MHCⅡ类分子反式激活因子）和STAT-1α（信号转导及转录激活蛋白）的相应抗体，进一步阐明猪瘟病毒与MHC-Ⅱ／MAPK途径的相互机制。.本研究在抗原递呈细胞3D4/2（猪肺泡巨噬细胞）上探讨了猪瘟病毒对MHC-Ⅱ类相关因子的调控作用。荧光定量PCR和流式细胞技术实验结果显示，猪瘟病毒感染后不能有效刺激抗原递呈细胞（3D4/2）MHC-Ⅱ类分子的表达。但是，紫外线灭活的猪瘟病毒却能够在吸附细胞后的24小时内诱导MHC-Ⅱ类分子的上调。这一结果提示，猪瘟病毒的感染对抗原递呈细胞内MHC-Ⅱ类分子的表达和激活可能呈现抑制或负调控的作用。.通过荧光定量PCR和Western blot方法检测了MHC-Ⅱ类分子相关细胞信号通路的多个因子的表达情况。结果表明，猪瘟病毒感染3D4/2巨噬细胞后的12—48小时STAT-1α、磷酸化ERK/P42（细胞外信号调节激酶）在细胞内含量逐渐降低，提示STAT-1α、磷酸化ERK/P42这两个重要因子在JAK-STAT和MAPK信号通路中可能参与了猪瘟病毒抑制MHC-Ⅱ类分子的机制。