NK细胞体外抑制丙型肝炎病毒复制活性与KIR2DL3/HLA-C1基因组合的相关性研究

HCV感染极易慢性化的趋势说明机体免疫系统对于HCV的清除是不成功的，近期研究表明，自然杀伤细胞（NK）的功能受损是形成HCV慢性感染的关键因素，但是NK细胞在抗HCV感染免疫中的具体功能及作用机制尚不清楚。目前已知NK细胞受体KIR2DL3与其配体HLA-C1基因组合与丙型病毒性肝炎病人的HCV清除具有明显的相关性，但其功能基础不清楚，本研究在提出"携带KIR2DL3/HLA-C1基因组合个体的NK细胞具有较强的抗HCV活性"假设的基础上，通过观察不同基因型个体NK细胞体外对HCV FL-J6/JFH1感染CD4+ T细胞株抑制活性的差异，比较KIR2DL3+ NK细胞表面CD107a的表达水平，证实KIR2DL3+/HLA-C1基因组合与NK细胞体外抑制HCV复制活性之间的相关性，深入认识NK细胞抑制HCV复制的分子机制，为设计新的丙型病毒性肝炎免疫治疗措施和疫苗研制提供重要依据。

丙型病毒性肝炎是一种严重危害人类健康的常见病和多发病。全球大约有1.7亿人感染丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus, HCV）,且极易慢性化，其中的10-20%发展成肝硬化，并与肝细胞癌的发生密切相关。研究表明，自然杀伤细胞（natural killer cell，NK）的功能受损及CD4+ T细胞的感染是形成HCV慢性感染的关键因素。 NK细胞免疫球蛋白样受体（Killer Ig-like Receptor，KIR）是NK细胞受体中特别重要的一类受体，近年研究发现，不同的NK细胞受体KIR与相应人类白细胞抗原（HLA）配体基因组合与多种疾病具有相关性，流行病学调查发现KIR2DL3 /HLA-C1基因组合与HCV的清除具有明显的相关性。KIR2DL3/HLA-C1基因组合与NK细胞体外抑制HCV复制的活性之间是否也存在类似情况值得从分子机制方面深入研究。能否建立HCV体外细胞模型，并在体外对CD4+T成功感染成为关键。在本项研究中，我们对40例随机健康人群进行了KIR及HLA-Cw位点基因分型，提取了不同基因型个体的NK细胞及CD4+ T细胞，建立了HCV(J6/JFH)体外细胞培养系统，并用上述培养系统产生的病毒颗粒成功的对CD4+ T细胞进行了感染。分型结果显示：40例样本中HLA-Cw位点HLA-C1基因出现频率较HLA-C2高，且HLA-C1C1出现的频率较HLA-C1C2高；KIR基因型中，以3DL1、2DL1、2DL3、2DL4、3DL2、3DL3、2DP1、3DP1、2DS4出现频率较高，而3DS1、2DS1、2DS2、2DS3、2DS5、2DL2、2DL5出现频率较低；KIR2DL3+/HLA-C1C1例数较KIR2DL2+/HLA-C1C1多。以上可见，KIR2DL3+/HLA-C1基因型组合以KIR2DL3-2DL3/HLA-C1C1者较多，占总样本数52.5%。在HCV体外培养系统构建中，我们发现HCV(J6/JFH)Huh-7.5细胞株体外培养系统可产生具有感染作用的HCV病毒颗粒，且HCV可在体外对人CD4+ T细胞进行感染。本项研究证明，除肝细胞外，HCV可在体外对CD4+ T细胞进行感染，为进一步研究HCV极易慢性化的机制和确定KIR2DL3/HLA-C1基因型组合与NK细胞体外抑制HCV复制的相关性奠定了重要基础。