应用树鼩模型动态观察乙肝病毒感染过程中宿主肝内的免疫反应并对模型进行再优化

Based on a series of studies on tree shrews (Tupaia) infected with hepatitis B virus (HBV) in vivo carried on by our group in recent decades, and based on the new progresses in the related research fields, the present project is intended to carry out the following researches. Firstly, neonatal and adult tree shrews will be divided into several groups, which then will be inoculated respectively with different genotypes and different doses of HBV. Four weeks after inoculation, blood and liver biopsy samples will be collected regularly from all of the animals. The samples will be used to monitor the status of HBV infection, by detecting the HBV infection markers and the hepatic histopathological changes. The samples will also be used to detect the mRNA levels of a series of HBV-related immune genes and the HBV-related hot genes in liver tissue. Finally, the test results will be used to analyze the relationship between the expression levels of HBV-related immune genes or certain hot genes and the HBV-infection state of animals. The test results will also be used to analyze the influences of different HBV genotypes or doses in inoculums on the incidence of chronic HBV-infection and/or on the progress of the lesions in liver tissues of animals. The results of this project will likely to interpret preliminarily the immune mechanism underline HBV infection and pathogenesis. On the other hand, the results of this project will promote the HBV-related and HBV-associated hepatocellular carcinoma-related studies by providing a re-optimized tree shrew model.

本项目拟基于我们前期的研究积累和国内外相关研究领域的新进展，开展如下主要研究：对新生和成年树鼩接种不同基因型和不同剂量的HBV后，定期采集血和肝活检组织标本进行两方面的检测观察- - 1.各动物感染HBV的状态（通过检测血和肝组织的HBV感染标志、观察肝组织的病理改变）；2.肝组织内一系列编码HBV免疫相关基因以及与HBV感染相关的热点基因的mRNA表达水平。最后对动态检测观察的结果做两方面的分析- - 1.各动物的感染状态与其肝组织内的HBV免疫相关基因及某些热点基因表达水平的相关性；2. 接种不同的HBV基因型和剂量对树鼩的慢性感染率、肝组织病变进程的影响。本项目的研究结果，将可能一方面通过展现机体感染HBV过程中肝组织内免疫反应的动态变化来初步阐释HBV的感染和致病机制， 另一方面将以经过再优化的树鼩模型来推动HBV感染及其相关肝癌的研究进展。

本项目在我们前期的研究积累的基础上，开展如下主要研究：①对新生和成年树鼩接种不同基因型和不同剂量的HBV，探讨不同的HBV基因型、不同的接种剂量等因素对树鼩的慢性感染率的影响，达到再优化树鼩体内感染HBV模型的目的；②检测感染树鼩HBV免疫相关基因表达水平，比较各动物的感染状态与其肝组织内的HBV免疫相关基因表达水平的相关性，探讨这些免疫相关基因在HBV感染中的作用以及HBV感染的致病机制。结果提示：①不同浓度剂量的HBV DNA对新生树鼩感染的转归有显著影响。低、中浓度的HBV DNA感染率高，但感染持续时间不长，多为自限性或一过性感染，高浓度的HBV DNA感染，虽然感染率相对较低，但病毒利于在体内复制，形成慢性感染状态。②IL-10、IL-18在感染树鼩体内表达水平升高,且随感染持续时间的增长而升高，说明树鼩感染人HBV后体内的适应性免疫应答被激活，且IL-10、IL-18参与清除HBV并对树鼩感染慢性化的进程可能起重要作用。③慢性感染组和疑似慢性感染组树鼩外周血TLR-4与IL-6的浓度均高于未感染对照组，其差异均有统计学意义（P＜0.05）；肝组织中TLR-4及IL-6的mRNA水平的表达均高于对照组，且差异有统计学意义（P＜0.05）。表明人HBV能在新生树鼩体内成功感染，激活树鼩体内的免疫应答，且TLR-4、IL-6在树鼩HBV感染过程中升高，与人乙型肝炎患者血清中的TLR-4、IL-6表达水平基本相似。本研究中还发现TLR-4与IL-6血清分泌量在疑似感染组中都随时间呈进行性下降趋势，而在慢性感染组中却保持相对恒定高水平的分泌，可能是疑似慢性感染组动物呈一过性感染表现，机体通过体内免疫反应，引起被感染细胞的凋亡，并促进机体的适应性免疫，最终清除感染的病毒。表明TLR-4与IL-6持续高表达，与树鼩感染HBV后转归有一定的相关性，在树鼩感染HBV进程中起重要作用。