哮喘外周血淋巴细胞特异CD44亚型的研究及其临床意义

Asthma is a chronic airway inflammatory disease, and Th2 cells play a critical role in initiating and sustaining asthmatic inflammation. It has shown that CD44 expressed on CD4+T cells plays a critical role in the accumulation of antigen-specific Th2 cells in the development of AHR induced by antigen challenge in the airway .The aim of this study was to find out if there are specific CD44 variant isoforms(CD44v) expressed on asthmatic patients lymphocyte and then to research the detail about its function in asthma through the animal experiment.We investigate whether the CD44v could influence the secretion of Th2 cytokine and participate in its anti-apoptosis process.

哮喘是一种多细胞及细胞因子参与慢性的呼吸道炎症性疾病，是由于Th1/Th2细胞失衡引起的一种过敏性反应。Th2细胞是哮喘发生和发展的关键性细胞，目前有研究表明哮喘患者Th2细胞中CD44分子表达上调，Th2细胞在哮喘中发挥的作用需要CD44的参与。CD44分子的变异亚型众多，并且在不同细胞间及不同条件下发挥的功能不同，目前有关CD44分子的变异亚型对哮喘发生机制的研究还很少。我们首先筛选哮喘小鼠外周血淋巴细胞特异CD44亚型(CD44v)并进行验证。然后对特异CD44v在哮喘中作用研究，包括：CD44v是否参与了调节TH2细胞因子分泌及是否增强了细胞因子的分泌；否参与了淋巴细胞的抗凋亡；通过RNAi技术，还进一步对抑制CD44变异亚型治疗哮喘进行研究,从而对使用CD44分子对哮喘的诊断以及靶向治疗的实现提供基础。

白介素4（IL-4）与其CD4细胞表面受体（IL-4R）结合后诱导辅助2型(Th2)细胞分化。但Th2细胞的过度分化会引起I型超敏反应，导致过敏性疾病的发生。调节Th2细胞分化却又不影响Th1细胞的功能的免疫治疗策略可使过敏性哮喘患者受益。但是如何精确调节Th2细胞分化目前仍不十分明确。.CD44是一型跨膜蛋白，也是T细胞活化的重要分子标记。有研究表明CD44参与了Th细胞的分化。依据CD44分子是否包含有变异体外显子，可以将CD44分为两大类：一种是标准型CD44(CD44s)，另一种变异型CD44(CD44v）。通过不同的mRNA剪切机制，CD44v又包含多种变异亚型,并发挥不同的生物学功能。之前的CD44参与Th细胞分化研究是将所以CD44亚型视为一种分子，具体哪些CD44亚型参与其中，它们又是否起了关键的调节作用仍不清楚。.我们使用4名健康成人初始CD4T细胞体外诱导Th2细胞分化后发现，四名志愿者Th2细胞中CD44v5亚型高表达。然后使用抗CD44v5抗体封闭v5变异区，并检测磷酸化STAT6（p-STAT6）以及GATA3（均为Th2分化标志物）发现：抗CD44v5可明显抑制Th2细胞分化，并且使用不同浓度抗CD44v5抗体封闭后分别检测：p-STAT6以及IL-4分泌水平，发现Th2分化的抑制具有浓度依赖性。免疫荧光共聚焦实验发现CD44v5与IL-4Rα存在共定位，抗体封闭后共定位消失并且IL-4Rα表达水平降低。使用微管系统抑制药物paclitaxel抑制细胞膜受体内体化，后发现该处理可逆转CD44v5封闭后导致的IL-4Rα水平降低，说明抗体封闭后，由于缺乏CD44v5的结合使得IL-4Rα的内化加强，进而降解，细胞由于Th2信号受体缺乏导致了分化受抑制。.使用CD44v5敲除的T细胞对结果进行验证，我们得到了相似的结果，且未对CD4T细胞的增殖产生影响。我们进一步进行了临床研究，体外培养了21名过敏性哮喘患者的外周血T细胞，我们发现在培养过程中加入抗CD44v5抗体后，可明显抑制Th2细胞因子的分泌。通过临床研究证实了CD44v5可以有效抑制哮喘患者Th2细胞分化。.综上所述CD44v5是一个重要的Th2细胞分化调节蛋白，抑制CD44v5能够抑制Th2细胞，是一个较好的潜在哮喘免疫治疗的靶标。