BP-IRF-4-IL-21通路调节Th17细胞参与原因不明复发性流产的机制研究

Abnormal immunity is the important reason for unexplained recurrent spontaneous abortion (USRA). The role of Th17 cells in the development of USRA has been confirmed in previous study, but it's poorly understood as to the generation regulation and action mechanism of Th17 cells. IRF-4 plays an important role in the differentiation of Th17 cells, which is regulated by IBP. During the development of USRA in vitro and in vivo, on one hand, we study the activation of antigen presenting cell, effect of several cytokines on the expression of IBP, IRF-4 of CD4+T cell, detected by IL-21and RORγ at transcriptional level and the regulation of the production of several cytokines. On the other hand, shRNA block the expression of IBP,IRF-4 and IL-21 to observe the effect of Th17 on USRA. This study is aimed at exploring the mechanisms of IBP-IRF-4-IL-21 channel in regulating Th17 cells involved in URSA and providing a more comprehensive immunlogical therapy for URSA.

免疫学异常是导致原因不明复发性流产（URSA）发生的重要原因。本课题组的前期工作已证实Th17细胞参与了USRA的发生与发展，但是对于URSA过程，Th17细胞如何生成,调节以及发挥作用的机制尚不明确。IRF-4在Th17细胞分化中起到重要的调节作用，并受到IBP调控。本研究通过体外以及体内试验观察URSA发生过程中抗原提呈细胞的活化以及各种细胞因子对CD4+T细胞IBP，IRF-4表达的影响，检测IL-21, RORγ转录水平以及各种细胞因子生成的调节，观察该通路对Th17细胞所介导的自然流产的调节机制；并采用shRNA阻断IBP，IRF-4以及IL-21表达，观察对Th17细胞生成以及URSA发生的影响，以期阐明IBP-IRF-4-IL-21 通路调节Th17细胞参与URSA机制，为临床治疗URSA提供新的更全面的免疫治疗策略。

哺乳动物的妊娠是一个特殊的、动态的免疫过程。在这段时期里，母体能忍受异体胚胎/胎儿在体内的生长，母胎免疫耐受异常是导致自然流产发生的重要因素之一。Th17细胞作为CD4+效应性T细胞的一个新亚类，可选择性地分泌白介素17（IL-17），在诱导炎症反应和免疫排斥中具有重要作用，并可能介导了自然流产的发生，但是其具体作用和机制仍不明确。干扰素调节因子4（IRF4）作为干扰素调控因子家族中淋巴细胞特异性的一员，参与了Th17细胞的分化，但是其在母胎界面的表达及对妊娠免疫的调控作用仍然未知。本项目构建了自然流产小鼠模型、Toll样受体3（TLR-3）相关的流产小鼠模型、LPS诱导小鼠流产模型等等，同时纳入人自然流产的蜕膜样本和相关临床研究，采用实时荧光定量PCR、western-blot、流式细胞学等实验手段，从多个层面探讨了Th17细胞与妊娠免疫状态，以及自然流产的相关性，并围绕“Fyn-IRF4-Th17细胞”和“Rock2-IRF4-Th17细胞”两条通路，针对相关机制进行了探索和分析。我们的实验结果显示：1. Th17细胞对于妊娠免疫状态十分重要，并参与了自然流产的发生；2. IRF4主要表达于母胎界面的淋巴细胞中，其可能通过RORγt作用于Th17细胞的分化和功能，参与母胎免疫调控，影响妊娠结局；3. 妊娠过程中母胎界面同时存在 Fyn和Rock2的动态表达，两者均可作为IRF4的上游调控因子，参与调控母胎界面Th17细胞的增殖分化和功能，进而介导自然流产的发生；4. IL-17在自身免疫性疾病（桥本氏甲状腺炎）相关的自然流产中具有重要作用，并可影响辅助生殖技术的妊娠结局。本研究着重探讨Th17细胞与自然流产的相关性，首次在母胎界面检测到了Fyn、IRF4和Rock2的表达，对其相关功能的研究有利于我们进一步理解Th17细胞在妊娠中的作用，以及妊娠免疫的调控机制，为防治自然流产的发生提供重要的理论基础和创新性的临床思路。