原因不明复发性流产中Wnt信号通路调控Treg细胞功能的机制研究

妊娠成功与否有赖于母胎免疫耐受的平衡，我们前期研究已发现：原因不明性复发性流产(URSA)母胎界面免疫耐受的紊乱主要受CD4+CD25+调节性T（Treg）细胞的影响，但URSA中调控Treg细胞功能的机制尚不十分清楚。最新研究报导：Wnt信号通路不仅参与T细胞的发育、分化、迁移和生存，还能调控Treg 细胞的功能。本研究拟从临床、体外细胞学实验和动物实验等角度，系统分析Wnt信号通路对蜕膜Treg细胞增殖、迁徙、凋亡、免疫抑制活性，及对复发性流产小鼠胚胎丢失率的影响，揭示Wnt信号通路调控Treg细胞功能在母胎免疫耐受形成中的作用，进而阐明URSA发病的免疫学机制，以期为开创URSA靶向Wnt信号通路的免疫治疗提供新思路。

背景：妊娠成功与否有赖于母胎免疫耐受的平衡，调节性T细胞（Treg）在妊娠免疫耐受中占有重要地位，Wnt 信号通路不仅参与T 细胞的发育、分化、迁移和生存，还能调控Treg 细胞的功能。本课题在我们前期母胎免疫耐受研究的基础上进一步探讨了原因不明性复发性流产(URSA)中Wnt信号通路对Treg 细胞功能的机制调控。.方法：通过检测蜕膜Treg细胞上Wnt家族成员表达水平，初步确定经典Wnt信号通路在人类Treg细胞的存在，并比较了URSA组与正常早孕组之间的差异；分离纯化蜕膜Treg细胞和蜕膜基质细胞，在体外共培养，探讨母胎界面蜕膜基质细胞对Treg细胞Wnt信号通路调节所发挥的作用；在蜕膜Treg细胞体外培养体系中，分别加入Wnt信号通路激动剂SB-216763 (Coghlan et al, 2000)或抑制剂DCA (Pai et al, 2004) 作用于Treg细胞，调节Treg细胞内Wnt信号通路活性状态，分析Treg细胞增殖、迁徙、凋亡、免疫抑制活性等改变情况；动物实验观察Wnt信号通路活性调节对复发性流产（CBA/J雌鼠×DBA/2雄鼠交配）雌鼠胚胎丢失率的影响。.结果：蜕膜Treg细胞内存在经典Wnt信号通路和Wnt信号通路活性状态；Wnt信号通路激动剂或抑制剂作用于Treg细胞，Treg细胞内Wnt信号通路活性状态会发生改变，主要表现为下游靶基因表达和细胞因子的改变；特别是蜕膜基质细胞上Wnt1、Wnt3A、Wnt8、DKK1信号对Wnt信号通路的活性产生影响；而且血清DKK1水平与蜕膜Treg细胞表达频率呈显者负相关；体外和动物试验均证实：实验结果显示wnt-3a可以显著活化Treg细胞Wnt信号，而这种活化的Wnt信号可以分别被外转DKKI质粒明显抑制；当外转-catenin质粒时Treg细胞中Wnt信号可以显著活化，而这种活化的wnt信号不能被共转DKKI质粒所抑制。Wnt信号通路激动剂SB-216763会增加小鼠的胚胎吸收率，而Wnt信号通路抑制剂DCA并不影响小鼠的胚胎吸收率。.结论： Wnt 信号通路对蜕膜Treg 细胞增殖、迁徙、凋亡、免疫抑制活性产生影响，但动物试验证实Wnt通路激动剂对复发性流产小鼠胚胎丢失率的影响，抑制剂对小鼠胚胎丢失率的影响有待进一步探讨。