PD-1基因启动子区域甲基化状态对慢性HBV感染者T淋巴细胞PD-1表达的影响

慢性乙型肝炎病毒感染者的细胞免疫，尤其是T淋巴细胞功能低下与HBV持续感染以及慢性乙型肝炎抗病毒治疗效果欠佳有关。现有研究证实：慢性乙肝患者T细胞表面高表达一种被称为T细胞程序性死亡因子-1（PD-1）的共刺激分子，PD-1在T细胞表面的高表达导致T细胞功能缺陷。PD-1表达异常的机制目前尚不明确。PD-1基因启动子区域甲基化状态对慢性HBV感染者T淋巴细胞功能是否存在影响？是如何影响T细胞功能的？目前国内外未见相关的报道。本课题以PD-1基因启动子区域甲基化对PD-1基因转录表达的调控作用为着眼点，研究慢性乙型肝炎患者和正常人T细胞PD-1基因启动子DNA甲基化状态的差异，DNA低甲基化下PD-1基因异常表达的功能意义，从DNA甲基化异常的角度寻求慢性乙型肝炎患者T细胞表面高表达PD-1的原因。为临床上寻求恢复慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞功能，寻找抗病毒治疗的新方向提供理论依据。

程序性死亡受体-1（programmed death 1,PD-1）是在发生程序性死亡的T细胞上发现的分子量为55KD的单体I型跨膜蛋白，属于CD28/CTLA-4免疫球蛋白超家族的免疫抑制性受体。大量研究证实：PD-1高表达与T淋巴细胞数量耗竭及功能低下关系密切。多项针对慢性乙肝病毒感染者外周血病毒特异性T淋巴细胞PD-1表达水平进行的研究发现：PD-1分子在HBV慢性感染者特异性CTL细胞上的表达水平也存在较大差异，影响PD-1在慢性乙型肝炎患者淋巴细胞上表达水平的因素及其机制目前仍尚未明确。为此，本课题检测并分析了慢性HBV感染者外周血单个核细胞上PD-1表达水平及其可能的影响因素；用甲基化抑制剂5-杂氮胞苷干预体外培养的淋巴细胞系Molt-4，明确PD-1在淋巴细胞上表达是否受到PD-1启动子甲基化状态的影响；并进一步用亚硫酸氢钠测序法检测慢性HBV感染者PD-1基因启动子区域甲基化状态及eAg对慢性乙型肝炎患者甲基化状态的影响。旨在探讨慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞上程序性死亡受体-1表达和PD-1启动子区域甲基化水平的差异及其影响因素，以及几者之间的关系。本课题研究发现：不同免疫状态下慢性HBV感染者外周血单个核细胞、CD4+T、CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达程度不同，CD4+T、CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达与机体的免疫调节及免疫活化状态密切相关。血清HBeAg可以明显影响CHB患者外周血T单个核细胞表面PD-1的表达，是影响其PD-1表达的重要因素。本课题首次发现：慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞上PD-1基因转录水平可能受PD-1基因启动子区域甲基化状态调控。其基因启动子部分转录因子结合位点甲基化状态可能受到乙肝病毒e抗原影响。本课题相关成果已经发表4篇文章，其中1篇发表在SCI杂志上,2篇发表在中华系列杂志上，1篇发表在中南大学学报上。