PD-1在慢性HBV感染体液免疫失调中机制研究

Immunotherapy, which aims to achieve disease treatment by activating or inhibiting the function of immune cells, has received great attention in recent years. At present, the use of antibodies and other means to block immunoregulatory checkpoint, such as PD-1, CTLA-4, etc. to activate immune cell function, has been used in the treatment of tumors and other chronic diseases. Our previous study showed that blocking CTLA-4 on Treg can rescue the function of Tfh/GC and promote the clearance of HBV. This project intends to study the effects of PD-1, which is similar to CTLA-4, on humoral immunity and explore its mechanism. In the early stage, we stumbled upon the fact that blocking PD-1 can also accelerate the clearance of HBV antigens in chronic HBV infention, but the mechanism is unknown. The implementation of this project will answer the effect of PD-1 on humoral immune function, which may be a new target for treatment of chronic hepatitis B(CHB).

近年来，通过激活或抑制免疫细胞的功能来达到治疗疾病目的免疫疗法得到了极大的关注，其中，利用封闭性抗体等手段阻断免疫负调节位点，如PD-1（programmed death-1），CTLA-4（Cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4）等来活化免疫细胞功能，在肿瘤及其他慢性疾病的治疗中已有所应用。我们前期研究成果显示封闭调节性T细胞（Treg）上的CTLA-4可以挽救与抗体分泌直接相关的Tfh/GC的分化紊乱，进而促进HBV抗原的清除。本项目拟通过封闭与CTLA-4功能相似的PD-1，研究其对体液免疫的影响。我们偶然发现，封闭PD-1同样可以加速慢性HBV感染模型抗原的清除，但是其针对体液免疫的作用机制未知，本项目的实施，将回答PD-1在慢性HBV感染中对体液免疫功能的影响，有助于为慢性HBV感染的免疫治疗提供新的靶点。

对于慢性HBV发生机制的研究，之前主要集中在细胞免疫，其中针对CD8+T细胞研究较多，且有很大进展。我们的研究发现，体液免疫紊乱也是慢性HBV感染发生的重要原因，可通过改善体液免疫状态促进HBV抗原的清除，本课题基于此，主要针对封闭PD-1/PD-L1信号通路改善慢性HBV感染中体液免疫失调的分子机制进行研究。.本课题研究发现，阻断PD-1/PD-L1信号通路后，慢性HBV感染模型的抗原清除以及抗体产生明显加强，其Tfh/GC的分化也得以恢复，并且对已经慢性化的模型小鼠同样奏效,上述结果在HBcAg组织化学水平也得到验证，也就是说，anti-PD-L1在一定程度上具有治疗慢性HBV感染的效果，且这种效果不受CD8+T细胞缺失的影响。调研文献发现，抗原递呈细胞DCs是一个重要的抑制性信号来源。在对比急慢性HBV模型的肝脏和脾脏中DCs亚群比例的变化后发现，慢性HBV模型小鼠脾脏中pDCs可能具有更强的抑制性效应。过继移植实验显示，急性HBV模型的脾脏pDCs可以促进慢性HBV模型抗原的清除以及体液免疫的恢复，而慢性HBV模型的脾脏pDCs则会导致急性模型的慢性化。在将慢性HBV模型pDCs过继移植给急性模型后，同时使用anti-PD-L1处理，可以解除pDCs的抑制性效果，其抗原的清除以及Tfh/GC的分化不受影响。总之，anti-PD-L1确实可通过解除pDCs的抑制性效应，促进HBV抗原的清除以及Tfh/GC的分化。.本课题，进一步丰实了慢性HBV体液免疫失调发生机制，在anti-CTLA-4解除Treg诱导慢性HBV发生的基础上，发现封闭pDCs上的PD-L1同样可以促进慢性HBV体液免疫失调的恢复并促进HBV抗原的清除。因anti-PD-L1已被用于部分肿瘤的治疗，其安全性可靠，在一定程度上具备治疗慢性乙肝的潜力，但是还需要临床实验验证，包括使用慢性乙肝患者外周血免疫细胞的体外刺激检测以及anti-PD-L1的肿瘤治疗中与HBV相关的临床数据检验。