平肝活血化痰法对高血压心肌纤维化信号传导网络调控机制的研究

心肌纤维化（MFs）是高血压引发心脏损害的重要病理学特征，然而其发生机制至今尚未阐明，治疗上也缺乏针对性的措施。大量的临床实践证实，平肝活血化痰法防治高血压心肌纤维化疗效确切，但作用机制不清楚。本项目拟在前期研究的基础上，应用 LiquiChip 蛋白液相芯片系统检测心肌纤维化相关因子表达谱，应用双向电泳、质谱仪等蛋白组学相关技术和方法，筛选差异磷酸化蛋白表达谱，然后利用免疫组化、Western Blot等方法鉴定关键蛋白质，应用生物信息学分析高血压心肌纤维化发生的有关因子与细胞信号分子（磷酸化蛋白）的内在联系，以弄清高血压心肌纤维化发生过程中的信号传导网络，为提供针对性的防治措施奠定理论基础。通过利用平肝活血化痰药物的干预研究，明确平肝活血化痰法防治高血压心肌纤维化的作用靶标及调控机理，为其临床应用提供理论依据。这对高血压心肌纤维化的防治具有重要意义。

平肝活血化痰法是临床治疗高血压心肌纤维化（MF）、左室肥厚的有效治法，天麻钩藤饮、血府逐瘀汤、温胆汤分别是平肝、活血、化痰的代表方。为了探寻中医抗高血压MF的最佳治法，并探明其防治高血压MF的机理，我们利用转基因自发性高血压大鼠（SHR）模型对三种治法与高血压MF的关系进行了研究。首先观察了三个方剂对SHR的血压和体重的影响；进一步应用Masson三色染色法对SHR左室心肌组织进行病理学观察，观察各组动物心肌纤维化的情况；并采用LiquiChip 蛋白液相芯片系统对与心肌纤维化相关的多种细胞因子进行了筛选，对于与三种治法作用机制相关的心肌纤维化的信号转导通路及关键信号分子，进行分析，采用免疫组化、RT-PCR及Western blot等方法进行了验证。实验结果表明：１.平肝、活血、化痰三种治法对SHR的血压均无明显影响，说明三种治法抗高血压心肌纤维化的作用机制,不是通过减轻压力负荷实现的。２.病理切片显示，血府逐瘀汤组心肌纤维化程度显著低于其余实验组，提示血府逐瘀汤抗高血压MF的作用优于天麻钩藤饮及温胆汤。３.对与纤维化相关细胞因子的筛选研究，发现三种治法抗高血压心肌纤维化的机制是多重的，与降低心肌组织和血浆AngⅡ、ALDO含量，抑制TNF-α、G-CSF、MCP-1、PKC、ERK1/ERK2、JNK、p38MAPK、ERK5、TGF-β1和IGF-1等多种细胞因子的表达和提高IFN-γ的表达有关。４.经免疫组化、RT-PCR及Western blot等方法对三个方剂比较分析，血府逐瘀汤抗高血压MF有明显的优势，且其作用机制与TGF-β１的表达有密切关系。５.故我们选取了TGF-β1/smad通路进行进一步的研究，结果表明血府逐瘀汤组大鼠心肌组织中TGF-β１mRNA的表达明显降低，与其它实验组相比，具有显著性差异。进一步对TGF-β１下游蛋白进行实验研究表明，血府逐瘀汤在降低TGF-β１蛋白表达的同时，可下调Smad2、Smad3蛋白的表达，上调Smad7蛋白的表达，提示血府逐瘀汤抗心肌纤维化的作用机制，与阻断TGF-β1/Smad通路有关。本研究首次初步确定活血化瘀法为抗高血压MF的有效中医治法，并揭示了血府逐瘀汤抗高血压MF的作用机制与阻断TGF-β1/Smad通路有关，为进一步阐明其作用靶点及活血化瘀法在抗高血压MF的临床应用中提供了重要的科学依据。