基于“虚-瘀-浊-毒”中药复方干预Alzheimer's病γ分泌酶及相关调控通路的分子机制研究

γ分泌酶是催化Aβ生成的终末阶段，在Aβ及老年斑形成中起非常重要的作用，目前γ分泌酶及调控途径已成为国内外Alzheimer's病领域的研究热点。本课题组经过前期国家自然科学基金项目（30672571与30873338）的研究和积累，发现基于"虚-瘀-浊-毒"中药复方有良好的抗痴呆、减轻APP转基因小鼠Aβ毒性损害和降低γ分泌酶主要活性成分早老素1表达的作用，据此进一步提出"基于'虚-瘀-浊-毒'中药复方抗痴呆作用与γ分泌酶及调控途径有关"的假说，为验证该假说，本研究拟采用APP/PS1双转基因拟痴呆小鼠模型和人APP/PS1双基因转染拟痴呆细胞模型为评价载体，以γ分泌酶及调控通路为主要靶点，采用神经分子生物学研究技术和手段，探索基于"虚-瘀-浊-毒"中药复方抗痴呆、干预γ分泌酶及相关调控通路的分子机制，为抗痴呆药物研究寻找新作用靶点，也为中医药研究Alzheimer's病提供参考和借鉴。

γ分泌酶是催化Aβ生成的终末阶段，在Aβ及老年斑形成中起非常重要的作用，目前γ分泌酶及调控途径已成为国内外老年性痴呆（Alzheimer’s disease，AD）领域的研究热点。本研究采用APP/PS1双转基因拟痴呆小鼠模型和人APP/PS1双基因转染拟痴呆细胞模型为评价载体，以γ分泌酶及调控通路为主要靶点，采用神经分子生物学研究技术和手段，探索基于“虚-瘀-浊-毒”中药复方抗痴呆、干预γ分泌酶及相关调控通路的分子机制。本课题分为两部分：第一部分，选用3月龄APP/PS1双转基因小鼠作为AD模型，随机分为4组，即模型组、西药组、HNYCF低剂量组及HNYCF高剂量组，同时以3月龄C57BL/6J小鼠15只作为正常对照组，给予等体积蒸馏水灌胃，每日一次，连续灌胃6个月进行相关指标检测。第二部分，选用人APP/PS1双基因转染细胞株（HEK293）作为AD模型，随机分为五组，即空白组、7.5%含药血清组、15%含药血清组、直接给药组和DAPT组，选择给药前、给药后24h和给药后48h三个时间点进行相关指标检测。结果显示，HNYCF保护体内模型的神经元及尼氏体结构或保护体外模型的线粒体功能、减少脂褐素生成，不同程度减少APP、Aβ1-40及Aβ1-42的生成（P＜0.01），用药后均有不同程度的减少可以显著抑制γ分泌酶的活性，对其部分组分有一定的调节作用。提示HNYCF提取物可以明显改善APP/PS1模型的认知能力或病理改变，显著抑制γ分泌酶的活性，具有防治AD的作用，其作用机制与促进CDC42的表达进而降低PS1 mRNA的稳定性及活性，抑制HIF-1a的表达影响γ分泌酶与底物之间的有效结合，降低Ap-1蛋白的表达减轻Aβ的细胞毒性，减少APP的裂解和Aβ的生成相关。