从炎症相关性肝癌IL-6信号通路及MicroRNA网络调控探讨基于“毒、瘀、虚”论治中药复方的干预作用机制

New studies suggest a strong association between inflammation and cancer. Hepatocellular carcinoma(HCC) represent a classic case of inflammation-linked cancer. The circular network linking inflammation with cancer, involving IL-6, NF-κB,microRNA let-7a and STAT3,is associated with cells malignant transformation and oncogenesis. IL-6 play a central role in the network.Activating IL-6 signaling pathway and abnormal regulation of the network are related to initiation of HCC. Because of the key role of IL-6 and inflammation in HCC model induced by diethylnitrosamine(DEN),based on the TCM pathogenesis of "evil,blood stasis, asthenia"and our earlier work, we will use Compound phyllanthus Urinsria Ⅱ(CPUⅡ)that has the function of"clearing away heat, eliminating toxin, activating blood circulation to dissipate blood stasis, invigoratory vital energy,strengthen spleen and invigoratory kidney" to interfere the process of HCC initiation and development that induced by DEN, and observe the expression level change of IL-6, NF-κB, let-7a, STAT3,etc,We inquire into the effect of chinese medical therapy on Regulating abnormal network that contain signaling pathway and microRNA related to inflammation- associated cancer,and elucidate the new mechanism of anti-cancer by anti-inflammation,enrich the scientific connotation of the therapy,and provide new evidence for clinical treatment.

新的研究证实炎症与癌症的发生关系密切，肝癌是一个经典的炎症相关癌症。慢性炎症反应导致以IL-6为中心、由NF-κB、IL-6、microRNA let-7a和STAT3为主构成的炎症相关癌症信号通路活化和网络调控失常，是细胞恶性转化和肝癌发生的主要病理机制。 基于IL-6和炎症反应在DEN诱导的肝癌模型中的关键作用，针对肝癌"毒、瘀、虚"的主要发病机制，本项目在前期研究的工作基础上，采用具有清热活血健脾补肾作用的叶下珠复方Ⅱ号对DEN诱导的肝癌模型进行干预治疗，观察肝脏癌变发生过程中炎症相关癌症信号通路网络关键分子IL-6、NF-κB、microRNA let-7a和STAT3等基因表达的改变， 探讨清热活血健脾补肾法对以IL-6为中心的炎症相关癌症信号通路网络失衡的调节作用，阐明其通过抗炎发挥抗癌作用的新机制，丰富该治法抗炎和抗肿瘤作用的科学内涵，为其临床应用提供新的依据。

目的 观察具有清热活血健脾补肾作用的叶下珠复方Ⅱ号对二乙基亚硝胺（DEN）诱导的肝癌大鼠模型中以IL-6为中心的炎症相关癌症信号通路网络失衡的调节作用，进一步探讨其抗肝癌的作用机制。方法 将240只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、叶下珠复方Ⅱ号高剂量组、低剂量组和阳性药治疗组。采用DEN诱导肝癌大鼠模型,造模18周，同时给药进行干预，每6周各组处死大鼠8只，观察大鼠一般情况、肝功能指标变化和肝癌结节形成情况，镜下观察大鼠肝组织病理变化，分别采用放免法和ELISA法检测大鼠血清IL-6、AFP水平；采用实时荧光定量PCR法、Western blot法分别检测肝组织IL-6信号通路及MicroRNA 调控网络基因的mRNA和蛋白质表达的改变。结果 实验第18周末，叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组大鼠肝癌结节数较模型组显著减少，差异有统计学意义（P<0.05）。叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组大鼠血清IL-6、ALT、AST水平与模型组比较均明显降低（P<0.05），血清ALB水平较模型组比较明显升高（P<0.05）。实验第18周末，与模型组比较，叶下珠复方Ⅱ号高剂量组MicroRNA let-7a表达量显著上升，NF-κB/P65、IL-6、lin28、stat3、ras和c-myc基因mRNA表达量均显著降低，差异均具有统计学意义（P<0.05）；叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组miR-21 、miR-181b-5p表达量均显著下降，与模型组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。实验第18周末，叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组NF-κB/P65、CYLD、STAT3和p-STAT3蛋白表达均显著低于模型组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 具有清热活血健脾补肾作用的叶下珠复方Ⅱ号通过下调NF-κB/P65表达和上调let-7a的表达，从而抑制IL-6的表达，阻断IL-6信号通路的活化，进而抑制DEN诱导肝癌的发生和发展，起到防治肝癌的作用。