卵巢癌细胞中血小板活化因子受体与表皮生长因子受体信号通路串话研究

Although the role of platelet-activating factor (PAF) in tumor has been paid more attention in recent years, the function of PAF and its receptor (PAFR) hasn't been valued in ovarian cancer yet. Our previously study demonstrated that PAFR was highly expressed in non-mucinous ovarian cancer cells. The activated PAFR could stimulate cell proliferation and invasion significantly. PAF could activate PI3K, Akt, and MAPK via FAK and Src, and induce a weak phosphorylation of EGFR as well. To this end, we propose the hypothesis, 1) The PAF may partially activate EGFR by transactivation. 2) There is cross talk between the PAFR and EGFR signaling pathway. To test this hypothesis, we would perform such experiments as lentiviral transfection, shRNA, co-immunoprecipitation, Western Blot and others, and explore the relevant mechanisms of PAF/PAFR on ovarian cancer cell. The study would complement the existing ovarian cancer associated signaling pathway from the new perspective of PAF/PAFR, which could provide new ideas for targeted therapy.

血小板活化因子（PAF）在肿瘤中的作用近年来受到关注，而目前卵巢癌中PAF及其受体(PAFR)的研究尚未受重视。我们前期发现PAFR在非粘液性卵巢癌中高表达，PAFR活化后可刺激肿瘤细胞增殖和侵袭；PAF作用肿瘤细胞后，不但可经FAK、Src激活PI3K，Akt，MAPK等与EGFR信号通路直接相关的蛋白；且可引起较弱EGFR磷酸化。为此，我们提出假说，PAF可通过"转活"（transactivation）部分激活EGFR信号通路，且PAFR与EGFR信号通路下游存在串话（cross talk）。为验证这一假说，我们拟采用慢病毒转染、shRNA、免疫共沉淀、Western Blot等手段，从分子、蛋白水平多方面深入探讨PAF/PAFR对卵巢癌细胞作用的相关机制，明确其与EGFR信号通路之间的关系。本研究将从PAF/PAFR这一全新角度补充现有的卵巢癌相关信号通路，为靶向治疗研究提供新思路。

卵巢癌是目前死亡率最高的女性生殖系统恶性肿瘤。由于其起病隐匿，病理类型复杂，且缺乏早期有效的诊断方法，大多数卵巢癌病人在诊断时已处于晚期。探索卵巢癌发生发展机制，寻找与其有关的靶基因，进行个体化治疗，是目前卵巢研究与治疗的方向。课题组既往的研究结果显示：血小板活化因子受体 (PAFR) 在非粘液性卵巢癌组织及细胞株中高表达，而在正常卵巢上皮中不表达，且PAF能够显示刺激PAFR表达阳性的卵巢癌细胞增殖及侵袭。对PAF作用后不同时间的卵巢癌细胞进行初步磷酸化蛋白芯片检测，显示EGFR在1068位点有磷酸化激活。即使选择足够高浓度的不同PAFR阻断剂，亦不能完全对抗PAF引起的细胞增殖及侵袭作用，因此我们猜想，PAF作用后还可能通过其他途径引起细胞增殖和侵袭。根据现有的研究结果，我们认为最有可能与其相关的是表皮生长因子受体 (EGFR) 相关信号通路。.因此，本课题深入地研究了PAF/PAFR信号传导通路与EGFR受体信号通路之间的串话联系及分子机制。而后考虑到，PAF在人体内半衰期极短，仅为数十秒。根据我们的预实验结果提示，卵巢癌患者血清中分解PAF的PAF乙酰水解酶(PAF-AH)含量明显高于健康者，而PAF的含量则无明显差异。那么，是否有其它促进PAF分泌的机制，使其形成自分泌环，从而持续的发挥作用？本课题观察了卵巢癌细胞中EGF对PAF的分泌影响并研究了其分子机制。再根据PAFR信号通路与EGFR信号通路之间的相互关系，推测卵巢癌细胞中PAFR与EGFR可能协同作用，共同促进肿瘤的发展。因而，在卵巢癌细胞中联合靶向PAFR及EGFR，在体内体外实验中观察其对卵巢癌的影响。.本课题在第一部分中探讨了卵巢癌细胞中PAF/PAFR信号传导系统转活EGFR受体的相关机制。在第二部分中首先检测了卵巢癌患者与健康对照者血清中PAF及分解PAF的乙酰水解酶 (PAF-AH) 的含量，发现卵巢癌患者血清中PAF-AH含量明显高于健康对照者。于是探索了体内可能存在的促进PAF分泌的机制。本课题在第三部分实验中观察了联合靶向PAFR与EGFR对卵巢癌细胞的影响。综上所述，卵巢癌细胞中，PAFR与EGFR可以相互转活，且两者下游存在共同的信号通路分子。联合靶向PAFR与EGFR能够更有效地抑制卵巢癌的发展。PAFR可能为卵巢癌靶向治疗提供了一个新的方向。