PAF/PAFR介导骨髓间充质干细胞与肿瘤细胞串话促进卵巢癌发生发展相关机制

Tumor microenvironment conferred by mesenchymal stem cells (MSCs) plays a key role in tumor development and progression. But the mechanism is still unknown. We previously found that the platelet activating factor receptor (PAF / PAFR) mediated inflammatory signaling pathways may promote ovarian cancer progression. We also observed a cPLA2 based molecule metabolic regulation ring in ovarian cancer microenvironment regulating the secretion of PAF. Our preliminary data indicated high concentrations of PAF was secreted by MSCs when co-cultured with SKOV3 cells. We speculated that the cross-talk between the MSCs and cancer cell in the tumor microenvironment could regulate ovarian cancer development and progression, which was mediated by PAF/PAFR signal. To verify our hypothesis, we will perform such experiments as in vitro co-culture, modified DMBA-induced ovarian cancer animal model, flow cytometry, time-lapse microscopy, gene knockdown and expression, gene chip, siRNA, IHC, ELISA, Western blot and other means, specifically to clarify the aggregation of MSCs in ovarian cancer stroma and their effects and mechanisms on cancer progression mediated by PAF/PAFR. The purpose of the study was to explore new tragedies for ovarian cancer treatment from the aspect of tumor microenvironment.

炎症微环境在肿瘤中的作用日益受到重视。骨髓间充质干细胞(MSCs)聚集到肿瘤局部参与形成间质，是肿瘤微环境炎症相关细胞的主要来源，在多种肿瘤中起重要作用，但机制仍不明。我们发现卵巢癌中血小板活化因子及受体(PAF/PAFR)介导的炎症相关信号通路可促进肿瘤进展，肿瘤局部微环境中存在以cPLA2为关键分子的PAF分泌代谢调控环，MSCs与SKOV3细胞共培养可分泌高浓度PAF。因此我们提出假说：肿瘤局部MSCs可通过PAF/PAFR介导间质与癌细胞之间对话(cross talk)，调控卵巢癌发生发展。本研究拟采用体外共培养、体内成瘤实验、改良卵巢癌诱发模型等手段，通过流式细胞、时差显微成像、基因芯片、siRNA、IHC、ELISA及免疫印迹等方法，明确卵巢癌发生发展中，MSCs在间质聚集并通过PAF/PAFR介导炎症信号促进肿瘤的作用及机制，目的在于从肿瘤局部微环境入手探索卵巢癌防治新方法。

卵巢癌是目前死亡率最高的女性生殖系统恶性肿瘤。由于其起病隐匿，病理类型复杂，且缺乏早期有效的诊断方法，大多数卵巢癌病人在诊断时已处于晚期。以往绝大多数的研究都关注肿瘤细胞本身，目前大量研究表明，肿瘤周围的炎性微环境在肿瘤的发生发展中起着重要作用。课题组既往的研究结果表明： PAF 可以通过直接激活PAFR或者转活EGFR活化下游相关信号通路，促进非粘液性卵巢癌细胞增殖与侵袭，在卵巢癌局部微环境中存在高浓度的PAF，预实验发现MSCs可分泌大量PAF，因此我们猜想，肿瘤细胞与间质微环境中的MSCs之间存在相互作用，调控由大量MSCs 组成的间质成分分泌高浓度PAF，从而加速肿瘤的增殖和侵袭。另外，肿瘤细胞干性被认为在肿瘤增殖、转移、复发和化疗耐药中起到重要作用，肿瘤微环境可以调节肿瘤细胞干性，影响肿瘤进展。课题组既往研究发现，顺铂可诱导卵巢癌细胞PAFR表达上调，应用PAFR特异性抑制剂可以提高卵巢癌细胞对顺铂治疗敏感性，因此我们猜想，PAF可能参与诱导卵巢癌细胞干性的转化。.因此，本课题深入研究了骨髓间充质干细胞对卵巢癌细胞的作用及PAF/PAFR信号通路在此过程中发挥的作用，而后考虑到，MSCs可分泌高浓度PAF，MSCs条件培养基可促进卵巢癌细胞干性，因此我们进一步观察了PAF对卵巢癌细胞干性的影响，并初步探究了PAF/PAFR信号通路在此过程中发挥的作用。.本课题第一部分探讨了骨髓间充质干细胞对卵巢癌细胞的作用，我们发现MSCs可分泌高浓度PAF，且MSC-CM可促进非粘液性卵巢癌细胞株增殖、迁移，诱导肿瘤细胞干性，使PAF/PAFR信号通路中p-FAK，Cyclin D1表达明显上调，PAFR特异性抑制剂可以阻断这种促进作用。体内同样发现MSCs可促进肿瘤生长，PAFR特异性抑制剂可以阻断这种效应。本课题第二部分我们发现PAF可促进卵巢癌细胞株体外成球能力、抑制静息的SKOV3进入细胞周期，上调卵巢癌细胞干性基因表达，PAFR特异性抑制剂可抑制这种作用。体内实验同样观察到PAFR特异性抑制剂GB可降低肿瘤组织中干性细胞比例，可能机制是细胞因子-细胞因子受体相互作用。综上所述, MSCs可以促进非粘液性卵巢癌细胞增殖，这一作用部分通过PAF/PAFR相互作用激活下游相关信号通路，PAFR特异性阻断剂GB可阻断上述作用。另外，PAF可以促进卵巢癌细胞干性化，PA