EB病毒相关胃癌的分子流行病学研究

Based on the collected questionnaire data and biosamples from a population-based case-control study on gastric carcinoma (GC), we attempt to ascertain the proportion of EBV-associated gastric carcinoma (EBVaGC) among all GCs, as well as to compare difference of risk factor profile and prognosis between EBV + vs – GCs in a high-risk area. Through profiling and comparing mutational and expression landscapes of the 2 subtypes of GC, we plan to probe the possible molecular mechanisms of the occurrence and prognosis difference of EBVaGC. The main research methods include subtyping of GCs through detecting EBV encoded microRNAs in paraffin-embedded tissue blocks of GC cases. Using serological assays and questionnaire data on environmental exposures, we will compare difference of risk factors between 2 subtypes of GCs. Furthermore, we will validate serological immunological biomarkers using baseline serum samples collected in cohort study, so as to explore the relationship between the host immune level and EBVaGC occurrence. In addition, we will perform whole-exome sequencing on fresh tumor tissues to profile mutational landscape, and will measure transcription factors of signaling pathways using PCR or western blotting, to explore underlying molecular mechanism of EBVaGC occurrence and prognosis difference. We expect that our results should provide new insights for the prevention and control of EBVaGC.

利用前期严格的人群为基础的病例对照研究收集的资料和生物样本库，试图确定高发区胃癌中EB病毒相关型的比例及与EB病毒阴性者在危险因素构成及预后的差异，同时比较EB病毒相关型与非相关型胃癌全基因突变图谱与表达图谱，以深入探讨EB病毒相关型胃癌发生与预后差异的可能分子机制。主要研究方法包括检测前期收集的胃癌病例的石蜡包埋组织切片EBV编码小RNA以定义胃癌类型，检测相关血清学指标，结合采集的环境危险因素等信息以比较两种类型胃癌危险因素的不同。应用前期队列随访数据进行血清学免疫指标的验证，从而明确机体免疫水平与EB病毒相关胃癌发生的关系。利用外显子测序技术描绘新鲜胃癌组织的全基因突变图谱，并通过Western Blotting等技术对肿瘤组织细胞活化信号通路中的转录因子进行检测，在分子水平上探索EB病毒相关胃癌的病因及预后的可能分子机制。预期研究结果将为EB病毒相关性胃癌的预防与与控制提供新思路。

本研究基于在江苏泰兴建立的以人群为基础的病例对照研究，检测了研究对象EB病毒及幽门螺旋杆菌的感染情况，并分析口腔卫生状况、肿瘤家族史、社会经济地位及食物保存方式、BMI及体型等环境暴露因素与胃癌发病风险的关系，同时完成循环肿瘤DNA标志物的筛选及肿瘤体细胞突变的识别。. 在本研究中，胃癌EB病毒检出阳性率约为0.8%；交界处胃癌病例组、胃体胃癌病例组和健康对照组中幽门螺杆菌感染率分别为76.85%，72.12%和65.60%。口腔卫生状况与胃癌发病风险的研究显示，在调整了全部可能的混杂因素后，每日刷牙次数≤1次的研究对象食管癌的发病风险约为≥2次组的2.4倍（OR=2.39；95%CI，1.94-2.94）。上消化道肿瘤（包括胃癌和食管癌）家族史与胃癌发病相关，在调整性别因素后，病例组一级亲属患上消化道肿瘤的累积风险是对照组一级亲属的1.44倍（HR=1.44，95%CI，1.25-1.65）。十年前家中有冰箱（OR=0.44；95%CI，0.21-0.94）和浴室（OR=0.73；95%CI，0.54-0.99）的家庭，其交界处胃癌发病风险较低；与低温密闭保存食物的方式相比，非低温密闭的方式能增加食管交界处胃癌的发病风险（OR=2.11；95%CI，1.47-3.03）。随着发病10年前BMI的增加、体型的增大，胃癌发病风险呈下降趋势。. ctDNA甲基化检测结果显示，ctDNA甲基化的PDR值随着肿瘤分期的恶化有明显增强趋势（P<0.001），其与泰州健康人群基线水平相比有明显差异，准确度高达90%，AUC=0.94；验证性结果发现其对诊断前0-2年内收集的样本的检测准确率达50%以上。. 通过100例胃体胃癌进行全外显子测序，共找到2,230,611个somatic突变，绝大部分突变位点分布在内含子区、外显子区和基因间区。按功能的突变类型分布来看，最主要的突变类型是错义突变。此外，我们发现突变碱基替换类型以C>T的转换为主，且发现了35个突变频率大于50%的基因。了解这些基因在蛋白互作网络中的角色及其相关的互作基因对下一步功能方面的研究具提示作用，研究结果也将为该地区胃癌的个体化防治提供理论依据。